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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】请熟悉考马斯亮兰法测蛋白含量的高手指点实验中遇到的问题。
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请熟悉考马斯亮兰法测蛋白含量的高手指点实验中遇到的问题。

我用考马斯亮兰法测蛋白含量时，做标准曲线用的G-球蛋白溶液（1mg/ml）是用纯化水溶解的，得到的标准曲线相关性是0.99947。
但做样品时，样品在纯化水中很难溶解，我用0.5%的碳酸氢钠溶解配制成1mg/ml（空白加入0.1ml的0.5%的碳酸氢钠和5ml的考马斯亮兰，且0.5%的碳酸氢钠在595nm下测紫外吸收为0.001），取0.04ml的样品溶液再用纯化水补充至0.1ml后测定，一共测定了六批样品，得到的蛋白含量都在0.5%左右，而用hplc测得的六批样品纯度都在95%以上，蛋白含量测定值明显偏高。
问题是不是出在标准曲线上啊，因为标准曲线是用纯化水溶解的，而样品测定时是用0.5%的碳酸氢钠溶解的。
请有经验的高手指点

[ Last edited by lanlan1119 on 2009-8-20 at 10:48 ]
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1楼 2009-08-20 08:59:05
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乐纷

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 8-20 13:32
我不是高手，只是做过这个实验。标线和样品测定最好用一样的溶剂配制，而且标线的相关系数至少做到0.995以上吧，这样误差小点。“而用hplc测得的六批样品纯度都在95%以上，蛋白含量测定值明显偏高”这句话不太理解，是认为蛋白是杂质吗？蛋白有紫外吸收吧，而且跟溶液pH值相关。
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2楼2009-08-20 09:48:30
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chinabull

至尊木虫 (著名写手)
★
opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 8-20 13:32
应该是方法之间的差别，需要用已知浓度的蛋白来标定两个方法的差别到底有多大。
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3楼2009-08-20 10:34:48
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lanlan1119

金虫 (小有名气)
发布帖子时有一些错误，相关性系数是0.99947，所用的碳酸氢钠是0.5%的。都在贴自里该过来了。
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4楼2009-08-20 10:49:41
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