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myxmyhh

银虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体转化过程中破碎原因求助

水稻黄化苗制备原生质体成功后,加入质粒混匀镜检没问题。

在加入40%PEG4000后,轻柔混匀时在管子中形成大块类似于藻类的绿色不溶物沉淀,镜检发现原生质体破碎

破碎的碎片黏在一起形成了上述沉淀,但实验过程中使用的试剂都是课题组用过不存在问题的,且PEG的浓度也对。

求助各位可能是什么问题造成的原生质体破碎。

本次实验跟之前的区别在于,这次使用了很多材料。

实验过程中,原生质体和杂质都比较多,使用W5 buffer清洗一次后,在管中残留200μl左右W5 buffer时加入1mL MMG溶液重悬细胞。

想请问大家是否体系中杂质太多也会导致加入PEG后细胞破碎?这是现在我能想到最有可能的原因。
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mgy123456

新虫 (小有名气)

2楼2021-11-16 19:50:11
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好幸运芽

新虫 (初入文坛)

求问楼主怎么解决这个问题的呀,我们做原生质体也是情况和您的很像

发自小木虫IOS客户端
3楼2022-06-20 23:54:42
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kamyiming

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你们解决了吗?我是加完40% peg4000,100g离心后没有任何pellet,你们有碰到过吗
4楼2022-11-07 11:03:33
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