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原生质体转化过程中破碎原因求助
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水稻黄化苗制备原生质体成功后，加入质粒混匀镜检没问题。 在加入40%PEG4000后，轻柔混匀时在管子中形成大块类似于藻类的绿色不溶物沉淀，镜检发现原生质体破碎 破碎的碎片黏在一起形成了上述沉淀，但实验过程中使用的试剂都是课题组用过不存在问题的，且PEG的浓度也对。 求助各位可能是什么问题造成的原生质体破碎。 本次实验跟之前的区别在于，这次使用了很多材料。 实验过程中，原生质体和杂质都比较多，使用W5 buffer清洗一次后，在管中残留200μl左右W5 buffer时加入1mL MMG溶液重悬细胞。 想请问大家是否体系中杂质太多也会导致加入PEG后细胞破碎？这是现在我能想到最有可能的原因。 |
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