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菊花茶

木虫 (著名写手)

[交流] 关于提取质粒问题

连接片段的载体PGM-T(天根),感受态细胞DH5α。提取质粒按照《分子克隆实验指南》碱裂解法提取(省去酚:氯仿抽提步骤)。但是用电泳直接检测条带是弥散的(下图),请高手指点哪里出问题了。前几次也是这样,而且酶切检测也是弥散条带。marker:2000,1000,750,500,250,100

电泳条带呈弥散状是什么原因,还有就是弥散带是什么东西?

[ Last edited by 菊花茶 on 2009-8-18 at 16:14 ]
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lzhaowin

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是质粒降解了,估计楼主在基因组变性和质粒复性这两步中振荡过猛了,应该温和一点~
22楼2009-08-19 00:03:47
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查看全部 29 个回答

charlies929

至尊木虫 (正式写手)

没这样提过,都是用Kit的现在很便宜的,生工的就很好用,楼主不妨买个试试
2楼2009-08-18 14:32:24
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


菊花茶(金币+1):谢谢参与
建议试剂重新配制或者直接买生工的试剂盒(BBI公司),很便宜的。 marker是正常的说明提取质粒的过程出现了问题。
为梦想努力。
3楼2009-08-18 14:51:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


菊花茶(金币+1):谢谢参与
操作过程中太猛烈了~~~
国产的天根小抽足够满足你的需求了,很便宜~~
4楼2009-08-18 15:01:17
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