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菊花茶

木虫 (著名写手)

[交流] 关于提取质粒问题

连接片段的载体PGM-T(天根),感受态细胞DH5α。提取质粒按照《分子克隆实验指南》碱裂解法提取(省去酚:氯仿抽提步骤)。但是用电泳直接检测条带是弥散的(下图),请高手指点哪里出问题了。前几次也是这样,而且酶切检测也是弥散条带。marker:2000,1000,750,500,250,100

电泳条带呈弥散状是什么原因,还有就是弥散带是什么东西?

[ Last edited by 菊花茶 on 2009-8-18 at 16:14 ]
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)

没这样提过,都是用Kit的现在很便宜的,生工的就很好用,楼主不妨买个试试
2楼2009-08-18 14:32:24
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


菊花茶(金币+1):谢谢参与
建议试剂重新配制或者直接买生工的试剂盒(BBI公司),很便宜的。 marker是正常的说明提取质粒的过程出现了问题。
为梦想努力。
3楼2009-08-18 14:51:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


菊花茶(金币+1):谢谢参与
操作过程中太猛烈了~~~
国产的天根小抽足够满足你的需求了,很便宜~~
4楼2009-08-18 15:01:17
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菊花茶

木虫 (著名写手)

操作过程很轻柔的,特别是加完裂解液之后颠倒时都很缓慢的
5楼2009-08-18 15:04:28
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rongrong1953

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
菊花茶(金币+2,VIP+0): 8-18 15:26
菊花茶(金币+1,VIP+0):请问你说的提取量大是什么意思啊 8-18 15:27
我们也是直接用的盒子,生工的
可能是:
1.提取量太大了
2.加了裂解液后缓慢轻摇,至液体粘稠。
试验重在细节,注意实验中的防护措施~
6楼2009-08-18 15:24:27
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)

★ ★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
菊花茶(金币+1,VIP+0):100次估计得多少钱啊,我可能得用上千次了 8-18 15:44
用试剂盒提吧,比较稳定,100次小提也不贵,不用那么多有毒物质了,都是吸附柱。
7楼2009-08-18 15:35:46
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


菊花茶(金币+1):谢谢参与
是不是离心管污染了,降解?或者就是裂解液体积相对不足.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-08-18 15:39:01
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liubing041

荣誉版主 (文坛精英)

忽忽家族之傻忽忽

优秀版主


菊花茶(金币+1):谢谢参与
我来接受一下熏陶
PS:不要自动发放BB了,以防像我这样的来投机取巧
“猫猫是谁?”....“还狗狗类...”
9楼2009-08-18 15:54:13
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)

80-90元,1000次才1千快。
10楼2009-08-18 16:01:06
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