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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于提取质粒问题
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菊花茶

木虫 (著名写手)

[交流] 关于提取质粒问题

连接片段的载体PGM-T（天根），感受态细胞DH5α。提取质粒按照《分子克隆实验指南》碱裂解法提取（省去酚：氯仿抽提步骤）。但是用电泳直接检测条带是弥散的（下图），请高手指点哪里出问题了。前几次也是这样，而且酶切检测也是弥散条带。marker：2000，1000，750，500，250，100

电泳条带呈弥散状是什么原因，还有就是弥散带是什么东西？

[ Last edited by 菊花茶 on 2009-8-18 at 16:14 ]
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1楼 2009-08-18 14:27:28
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
没这样提过，都是用Kit的现在很便宜的，生工的就很好用，楼主不妨买个试试
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2楼2009-08-18 14:32:24
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
建议试剂重新配制或者直接买生工的试剂盒（BBI公司），很便宜的。 marker是正常的说明提取质粒的过程出现了问题。
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为梦想努力。
3楼2009-08-18 14:51:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
操作过程中太猛烈了~~~
国产的天根小抽足够满足你的需求了，很便宜~~
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4楼2009-08-18 15:01:17
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菊花茶

木虫 (著名写手)
操作过程很轻柔的，特别是加完裂解液之后颠倒时都很缓慢的
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5楼2009-08-18 15:04:28
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rongrong1953

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
菊花茶(金币+2,VIP+0): 8-18 15:26
菊花茶(金币+1,VIP+0):请问你说的提取量大是什么意思啊 8-18 15:27
我们也是直接用的盒子，生工的
可能是：
1.提取量太大了
2.加了裂解液后缓慢轻摇，至液体粘稠。
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试验重在细节，注意实验中的防护措施～
6楼2009-08-18 15:24:27
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
菊花茶(金币+1,VIP+0):100次估计得多少钱啊，我可能得用上千次了 8-18 15:44
用试剂盒提吧，比较稳定，100次小提也不贵，不用那么多有毒物质了，都是吸附柱。
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7楼2009-08-18 15:35:46
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
是不是离心管污染了,降解?或者就是裂解液体积相对不足.
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-08-18 15:39:01
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liubing041

荣誉版主 (文坛精英)

忽忽家族之傻忽忽

优秀版主
★
菊花茶(金币+1):谢谢参与
我来接受一下熏陶
PS：不要自动发放BB了，以防像我这样的来投机取巧
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“猫猫是谁？”....“还狗狗类...”
9楼2009-08-18 15:54:13
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)
80-90元，1000次才1千快。
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10楼2009-08-18 16:01:06
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