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xueryuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 低温诱导目的蛋白较少,高温诱导目的蛋白在沉淀中 已有1人参与

分子量为84.5kDa,载体为pET-28a,宿主为BL21,已经尝试过表达优化,低温诱导情况下提高iptg浓度以及延长诱导时间,但上清中的目的蛋白都较少,25度开始表达目的蛋白就在沉淀中,求大佬们支招下一步该怎么办

低温诱导目的蛋白较少,高温诱导目的蛋白在沉淀中


低温诱导目的蛋白较少,高温诱导目的蛋白在沉淀中-1


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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
温度再低一些,18°C@16小时,如果不行,换ArcticExpress宿主菌,降到10°C,12°C

这样的表达量不算低了
行至水穷处,坐看云起时
2楼2021-08-14 10:43:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

(1)可以尝试ArcticExpress温度可以低至6-8°C,
(2)或可以尝试含GroEL的辅助表达菌种参与表达
(3)如果蛋白细胞毒性大,可以考虑分泌到细胞周质或培养基中
(4)或加入MBP,GST或其他助溶标签
(5)用体外TnT表达后纯化,成本会高一些
行至水穷处,坐看云起时
4楼2021-08-15 13:40:18
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