应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 低温诱导目的蛋白较少，高温诱导目的蛋白在沉淀中
51/1返回列表
查看: 2099  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者xueryuan将赠送您 5 个金币

xueryuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 低温诱导目的蛋白较少，高温诱导目的蛋白在沉淀中 已有1人参与

分子量为84.5kDa，载体为pET-28a，宿主为BL21，已经尝试过表达优化，低温诱导情况下提高iptg浓度以及延长诱导时间，但上清中的目的蛋白都较少，25度开始表达目的蛋白就在沉淀中，求大佬们支招下一步该怎么办

低温诱导目的蛋白较少，高温诱导目的蛋白在沉淀中


低温诱导目的蛋白较少，高温诱导目的蛋白在沉淀中-1


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2021-08-12 10:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
温度再低一些，18°C@16小时，如果不行，换ArcticExpress宿主菌，降到10°C，12°C

这样的表达量不算低了
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2021-08-14 10:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xueryuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2021-08-14 10:43:26
温度再低一些，18°C@16小时，如果不行，换ArcticExpress宿主菌，降到10°C，12°C

这样的表达量不算低了

谢谢您的回答试过十五度但是上清中目的蛋白量与高温对比差不多，是否可以考虑目的蛋白主要为包涵体的形式存在考虑对包涵体做出相应处理呢

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2021-08-15 11:22:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

（1）可以尝试ArcticExpress温度可以低至6-8°C，
（2）或可以尝试含GroEL的辅助表达菌种参与表达
（3）如果蛋白细胞毒性大，可以考虑分泌到细胞周质或培养基中
（4）或加入MBP，GST或其他助溶标签
（5）用体外TnT表达后纯化，成本会高一些
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2021-08-15 13:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶子Arger

新虫 (正式写手)
不知道你有没有考虑过目的蛋白不是分泌蛋白的问题，绝大部分蛋白在沉淀中可能是与细胞膜结合导致的，可以往这一方面考虑一下。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2021-08-16 17:33:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xueryuan 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭