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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助做过链霉菌接合转移的同学们呀
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王一琇

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助做过链霉菌接合转移的同学们呀 已有1人参与

我用PKC1139质粒进行属间接合转移，三个多月了都没有结合子生长不知道是什么问题呀。现在在进行条件摸索和体系建立。
就是孢子过滤洗脱后40℃，45℃，50℃，55℃这几个条件热激10分钟后，28摄氏度震荡培养2.4.6小时后，与生长到OD600=0.4-0.5的大肠杆菌1:1混合以后涂在含有20毫摩尔氯化镁的MS培养基上，放置16.18.20.22小时后涂相应萘啶酮酸和安普霉素，抗生素浓度都是做过敏感性实验的应该没问题，但是一直没有结合子生长，是我操作有问题还是这个质粒在我的菌体里不实用呀做过的小伙伴帮我看一下啦

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1楼 2021-08-11 13:59:24
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王一琇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunny12121 at 2021-08-12 10:50:04
不好做

能帮我分析一下具体是什么问题吗，感觉已经找不到能调试的条件了

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3楼2021-08-13 10:42:58
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匿名

本帖仅楼主可见
2楼2021-08-12 10:50:04
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Jopersen

新虫 (小有名气)
做了两年 是很不好做呀

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4楼2021-08-28 17:09:16
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若雪心漩

新虫 (小有名气)
先用pset152这种整合型质粒摸索条件，提高接合转移条件，再用pkc1139这种可能才能长少量接合子，直接用1139很难

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5楼2021-10-21 11:27:21
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