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求助做过链霉菌接合转移的同学们呀 已有1人参与
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我用PKC1139质粒进行属间接合转移，三个多月了都没有结合子生长不知道是什么问题呀。现在在进行条件摸索和体系建立。 就是孢子过滤洗脱后40℃，45℃，50℃，55℃这几个条件热激10分钟后，28摄氏度震荡培养2.4.6小时后，与生长到OD600=0.4-0.5的大肠杆菌1:1混合以后涂在含有20毫摩尔氯化镁的MS培养基上，放置16.18.20.22小时后涂相应萘啶酮酸和安普霉素，抗生素浓度都是做过敏感性实验的应该没问题，但是一直没有结合子生长，是我操作有问题还是这个质粒在我的菌体里不实用呀做过的小伙伴帮我看一下啦 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2021-08-12 10:50:04
能帮我分析一下具体是什么问题吗，感觉已经找不到能调试的条件了
3楼2021-08-13 10:42:58
4楼2021-08-28 17:09:16
5楼2021-10-21 11:27:21
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我也花了大半年的时间磨出来的，说说我的经验吧。首先是大肠杆菌的状态，供体的状态一定要好，不然做不出来的，一般我建议摇到0.6，用5毫升做供体。其次是受体，我之前用孢子一直做不出来，之后用菌丝体做出来了，菌丝体的接合转移比孢子效率高，但你得提前摸好菌丝体在不同时间段对应的OD值以及对应菌落数，这个过程比较痛苦，因为要不停的取样，测生长曲线，（这些得自己查文献，文献积累很重要），之后就是供受比，抗生素浓度，覆盖时间等条件了。记得多看文献！祝你顺利 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2021-10-29 22:16:10
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7楼2021-10-29 22:17:45
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8楼2021-10-29 22:22:26
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9楼2023-05-24 23:02:03
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【答案】应助回帖
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您好，想请教一下，我看您说用菌丝体做出来了，是不是说明孢子萌发不是结合转移的前提呀，所以孢子预萌发培养基也就没必要筛选； 然后也想知道如果想要筛孢子预萌发培养基，是要在不同的液体培养基培养后每隔一段时间在显微镜下观察孢子萌发情况，比较不同培养基下的萌发速度和数量吗？ 发自小木虫Android客户端 |
10楼2024-10-13 01:36:20
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