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rongrong1953

金虫 (小有名气)

[交流] 提出的DNA验证后,PCR跑不出来?

想请教一下:
       我用CTAB法提出的DNA后,直接跑电泳验证,浓度不低,也无降解,但是用模板引物跑PCR验证的时候却没有任何条带,请问各位前辈有什么见解吗?

问题解决了,总结一下:DNA的浓度是很重要的,有的时候不是浓度低了,而是浓度高了。
同志们继续加油!

[ Last edited by rongrong1953 on 2009-11-5 at 10:01 ]
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试验重在细节,注意实验中的防护措施~
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rongrong1953

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by rural2084 at 2009-8-18 13:25:
建议你,将DNA稀释后再PCR。DNA浓度高,PCR也出不来

我用的是10ng的,一般用量5-10ng,决定先稀释一倍看看吧
谢谢!
试验重在细节,注意实验中的防护措施~
8楼2009-08-18 15:17:42
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 8-18 13:20
PCR不是那么容易做出来的 好多因素影响的 你说的具体一点 好帮你分析一下
大体上在引物  酶浓度 循环上考虑一下。
海纳百川止于至善
2楼2009-08-18 12:35:34
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j2

木虫 (正式写手)

模板浓度高了?
还有就是镁离子浓度调一下试一试
修炼ing,当虫仙……
3楼2009-08-18 13:04:49
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rongrong1953

金虫 (小有名气)

PCR的条件没有问题,因为用对照模板和平行做的其它样品的模板都出来了的,就是其中的几个样没有跑出来,但是电泳检测DNA条带正常,后来又做了几次,还是这个样子,就找不到原因了......

[ Last edited by rongrong1953 on 2009-8-18 at 13:14 ]
试验重在细节,注意实验中的防护措施~
4楼2009-08-18 13:11:42
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