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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提出的DNA验证后，PCR跑不出来？
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rongrong1953

金虫 (小有名气)

[交流] 提出的DNA验证后，PCR跑不出来？

想请教一下：
       我用CTAB法提出的DNA后，直接跑电泳验证，浓度不低，也无降解，但是用模板引物跑PCR验证的时候却没有任何条带，请问各位前辈有什么见解吗？

问题解决了，总结一下：DNA的浓度是很重要的，有的时候不是浓度低了，而是浓度高了。
同志们继续加油！

[ Last edited by rongrong1953 on 2009-11-5 at 10:01 ]
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试验重在细节，注意实验中的防护措施～
1楼 2009-08-18 12:33:03
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 8-18 13:20
PCR不是那么容易做出来的 好多因素影响的 你说的具体一点 好帮你分析一下
大体上在引物  酶浓度 循环上考虑一下。
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海纳百川止于至善
2楼2009-08-18 12:35:34
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j2

木虫 (正式写手)
模板浓度高了？
还有就是镁离子浓度调一下试一试
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2009-08-18 13:04:49
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rongrong1953

金虫 (小有名气)
PCR的条件没有问题，因为用对照模板和平行做的其它样品的模板都出来了的，就是其中的几个样没有跑出来，但是电泳检测DNA条带正常，后来又做了几次，还是这个样子，就找不到原因了......

[ Last edited by rongrong1953 on 2009-8-18 at 13:14 ]
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试验重在细节，注意实验中的防护措施～
4楼2009-08-18 13:11:42
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rural2084

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-18 14:51
rongrong1953(金币+3,VIP+0): 9-5 16:09
建议你，将DNA稀释后再PCR。DNA浓度高，PCR也出不来
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5楼2009-08-18 13:25:05
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-18 14:51
同意楼上 模版浓度不要太高 十倍稀释一下 不要舍不得稀释
赞一下(6人) 回复此楼
海纳百川止于至善
6楼2009-08-18 14:33:15
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-18 14:51
恩，很有可能是模板浓度太高了，以前我也出现过这种情况，可以稀释成不同的浓度做几管试试
赞一下(6人) 回复此楼
为梦想努力。
7楼2009-08-18 14:47:50
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rongrong1953

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rural2084 at 2009-8-18 13:25:
建议你，将DNA稀释后再PCR。DNA浓度高，PCR也出不来

我用的是10ng的，一般用量5-10ng，决定先稀释一倍看看吧
谢谢！
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试验重在细节，注意实验中的防护措施～
8楼2009-08-18 15:17:42
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beisimai895

木虫 (小有名气)
直接将模板稀释几个倍数,如40,60.80倍后,再P一下看看.用基因组做模板,50微升体系中,DNA用量为0.1-1微克.
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9楼2009-08-18 15:38:12
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-18 17:47
可以试试touchdown,呵呵,退火温度设置一个梯度,我之前也碰到过这样的问题,后来

就是通过这个方式解决的.祝好运.
赞一下(6人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2009-08-18 15:41:09
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