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western blot问题
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虾中提取的蛋白（36kDa）做了模拟胃消化实验，电泳图看上去还可以，但是western blot结果简直离谱。转膜条件（200mA，1.5h）使用的PVDF膜(0.45μm)，5%奶粉室温封闭1h，一抗1:5000室温孵育2h（一抗兔多抗，之前4℃过夜也不太好），二抗1:5000室温孵育1h。 考虑接下来换成NC膜，使用5%BSA封闭是否可行？滤纸一定要用杂交滤纸吗？还有其他需要注意的地方吗？ 希望各位大佬指点一下，真的有点难。  电泳.jpg  western blot.jpg |
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