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wsshforget

金虫 (小有名气)

[交流] 有没有用TENS提取质粒的(关于酶切的问题)

我用TENS提取质粒,为什么酶切的时候总是酶切不完全或者有时候甚至切不动,请高手给我关于酶切质粒不完全时应该注意的事项,我用的是PST I切得质粒,质粒是PBR322。
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

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amisking(金币+2,VIP+0): 8-17 18:50
1 用其他的质粒,一样的提取方法对比下,最后酶切体系也一样,如果另一个能切开,这个且不开的话,就可能是质粒的酶切位点发生突变了.

2如果LAMBDA DNA能切开的话起码能够说明酶是没有问题的.
要是另两种质粒都能切开的话,就是提取方法的问题了.

自己排除下问题吧,质粒提上两种,酶切,电泳,一天就可以找到原因了.

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-17 18:32:02
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我还是习惯于把solutionI 和solutionII分开来.

呵呵,可能的原因有几个:1,酶切的质粒量相对较大;2,酶活力是否足,可以做个lamda DNA 的对照;3,DNA不纯;4,是否能证明这个载体的酶切位点都是好的.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-17 16:00:44
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wsshforget

金虫 (小有名气)

质粒大小是4.8K左右,影响吗?
3楼2009-08-17 16:55:01
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