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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有用TENS提取质粒的（关于酶切的问题）
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wsshforget

金虫 (小有名气)

[交流] 有没有用TENS提取质粒的（关于酶切的问题）

我用TENS提取质粒，为什么酶切的时候总是酶切不完全或者有时候甚至切不动，请高手给我关于酶切质粒不完全时应该注意的事项，我用的是PST I切得质粒，质粒是PBR322。
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1楼 2009-08-17 15:45:51
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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我还是习惯于把solutionI 和solutionII分开来.

呵呵,可能的原因有几个:1,酶切的质粒量相对较大;2,酶活力是否足,可以做个lamda DNA 的对照;3,DNA不纯;4,是否能证明这个载体的酶切位点都是好的.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-17 16:00:44
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wsshforget

金虫 (小有名气)
质粒大小是4.8K左右，影响吗？
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3楼2009-08-17 16:55:01
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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amisking(金币+2,VIP+0): 8-17 18:50
1 用其他的质粒,一样的提取方法对比下,最后酶切体系也一样,如果另一个能切开,这个且不开的话,就可能是质粒的酶切位点发生突变了.

2如果LAMBDA DNA能切开的话起码能够说明酶是没有问题的.
要是另两种质粒都能切开的话,就是提取方法的问题了.

自己排除下问题吧,质粒提上两种,酶切,电泳,一天就可以找到原因了.
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4楼2009-08-17 18:32:02
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