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基因克隆进载体在表达时可能出现移码，这种情况怎么避免？
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 最近在做抗体蛋白的真核表达，准备拿pcDNA3.1/His A来做真核表达载体，该载体图谱的酶切位点已上传。准备将Fc段基因克隆至Not I（GCGGCCGC） 和 Xba I (TCTAGA)之间，但是根据图谱的碱基来看,在Not I的最后两碱基(GC)后会存在缺少一个碱基组成三联密码子，因此我在设计引物PCR扩增Fc段酶切位点有意地在Not I后面（即Fc段之前)加入了一个碱基“T”，后面的Xba I 同上，这样的话相当于对Fc段基因做了改造，但是可以避免蛋白表达时出现移码，请问各位，这种增添碱基的方法有什么缺陷吗？  pcDNA3.1HIS.png |
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