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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因克隆进载体在表达时可能出现移码，这种情况怎么避免？
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小鱼的妈

铁虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆进载体在表达时可能出现移码，这种情况怎么避免？

最近在做抗体蛋白的真核表达，准备拿pcDNA3.1/His A来做真核表达载体，该载体图谱的酶切位点已上传。
准备将Fc段基因克隆至Not I（GCGGCCGC） 和 Xba I (TCTAGA)之间，但是根据图谱的碱基来看,在Not I的最后两碱基(GC)后会存在缺少一个碱基组成三联密码子，因此我在设计引物PCR扩增Fc段酶切位点有意地在Not I后面（即Fc段之前)加入了一个碱基“T”，后面的Xba I 同上，这样的话相当于对Fc段基因做了改造，但是可以避免蛋白表达时出现移码，请问各位，这种增添碱基的方法有什么缺陷吗？

基因克隆进载体在表达时可能出现移码，这种情况怎么避免？
pcDNA3.1HIS.png
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1楼 2021-07-29 10:22:47
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YU_DG

木虫 (正式写手)
可以用重组的方法，但是你这种，做融合蛋白，避免不了添加linker以及标签之类的

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2楼2021-07-29 14:53:55
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ken19860823

木虫 (正式写手)
有点多余的步骤 翻译的时候识别的是atg，atg之前一般加个gccacc帮助核糖体进入.atg之后别乱码就行，载体构建测序是金标准，ok了才能下一步

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做基因修饰的老菜鸡
3楼2021-07-30 09:47:31
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