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只为成才

铁虫 (小有名气)

[交流] 肠杆菌 基因敲除 诡异事件,求解! 已有1人参与

请教大家,我敲了一个基因(通过引入一个抗性片段),现在挑选   抗性板上的菌落  用 外部引物PCR片段测序,是敲除成功的,因为测序结果就是含有抗性片段,但是内部引物PCR也还是能检测到,测序结果表明也是我要敲除的那个基因,请问是什么原因?
1. 有点诡异的是,以前内部引物只有一个条带,后来长出来的pcr发现有好几个条带了!
2. 不知道有没有这样子的原因,我敲除的片段是该基因的五分之四,ATG开头的五分之一没有敲除,这样子会有影响吗?但是我设计的内部引物是后面部分的

这个菌我已经在抗性板上划线传代两次了!
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说!不说!不说吗?不说算了!
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你目前拿到的是单交换突变株,需要挑选双交换突变株。
2楼2021-07-21 10:05:50
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只为成才

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2021-07-21 10:05:50
你目前拿到的是单交换突变株,需要挑选双交换突变株。

qi请教一下,怎么筛选,一直划线传代后再挑选吗?
说!不说!不说吗?不说算了!
3楼2021-07-21 12:47:18
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