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硫酸羟氯喹EP检测方法，检测空白在主成分处有干扰，如何解决
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最近做了很多实验，一句话总结实验结果吧，磷酸二氢钾和庚烷磺酸钠一混合，跑不进样空白就会有个鬼峰，鬼峰与主成分出峰时间完全重合，必须消除鬼峰，请问如何消除（色谱方法不可以更换，色谱柱也不能更换。如果缓冲盐只用磷酸二氢钾，或者只用庚烷磺酸钠，则没有这个鬼峰，已经证明鬼峰与三乙胺无关） 具体实验结果罗列如下： P有关物质检测方法中流动相配置如下： 缓冲液：在900ml的色谱法用水中，溶解1.36g磷酸二氢钾(R)。加0.15g庚烷磺酸钠(R),用三乙胺（R）调整pH值到7.0，再用色谱法用水将溶液稀释至1000mL。（0.22um滤膜抽滤） 流动相（A）：甲醇（R）：缓冲液（10:90V/V） 流动相（B）：缓冲液：甲醇（R）（15:85 V/V） 混合溶剂（空白溶剂）：将500ml水、500ml甲醇和4ml 10% V/V硫酸溶液（R）混合。 色谱柱waters ACQUITY UPLC BEH C18 1.7um 2.1*50mm 实验一： 1、 按EP原文方法有关物质检测时运行空白，空白在主成分处有干扰峰出现。（不进针空白和进针空白均有） 注：不进针空白即为不进空白溶剂就仪器运行色谱条件。进针空白即为进空白溶剂运行检测。 2、 工程师上门对仪器系统充分冲洗，冲洗后运行条件，空白在主成分处有干扰峰出现 3、 更换同品牌新色谱柱和其它品牌粒径相同的色谱柱运行空白检测，空白在主成分处仍然有干扰峰出现。 4、 更换不同品牌仪器在不同实验室进行试验，检测空白图谱与本实验室的主峰处干扰一致 5、 增加在线过滤器和柱前保护柱，空白图谱在主峰处有干扰 6、 调整梯度洗脱的速率，在主峰处的干扰随着洗脱强度变化与主成分的峰跟随一致，空白在主峰处仍然有干扰。 7、 更换各个试剂牌子：磷酸二氢钾（川东化工、科隆、默克、Fisher、GENERAL、Damas-beta、广州西乐）；庚烷磺酸钠（山东、Aladdin、麦克林、Fisher、Damas-beta、默克）；三乙胺（科隆、TEDIA、Fisher、）；甲醇（TEDIA、Honeywell、Damas-beta）；注射用水、纯化水等各个品牌更换后进行流动相配置检测空白，仍然在主峰处有干扰峰的出现。 8、 单独排除各个试剂：磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠、三乙胺、纯化水、甲醇均无大的干扰峰出现。而将几种试剂磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠、三乙胺、甲醇按EP方法配置在一起后做流动相，运行空白检测时在主峰处出现干扰峰。 9、 采用ep上有类似流动相干扰检测增加特殊C18的膜对干扰峰吸收过滤，空白检测仍然在主峰处有干扰。 10、 将流动相配置过程中控温操作后进行空白试验，在主峰处有干扰。 11、 增加色谱先生的UPLC专用鬼峰小柱，主峰处的干扰排除，但是在RRT0.90的已知杂质C要分叉，且检测的峰型不稳定，而且EP系统适用性溶液的分离度随时都有可能达不到要求。 EP色谱分离技术上对梯度条件调整规定很严格，在色谱方法上不能做更改。 总结： 1、 通过彻底清洗仪器系统、更换实验室、更换不同品牌仪器、更换不同批次和品牌色谱柱，更换试药试剂品牌和纯化水、增加在线过滤器和色谱保护柱等均不能排除空白中在主成分处的检测干扰峰。增加鬼峰小柱能排除空白在主峰处的干扰，但是对已知的杂质C检测影响，杂质C会分叉，主峰也有可能会分叉。 2、 咨询EP官方，官方回复在她们实验室未出现干扰情况。 3、 DAD扫描空白中主峰处干扰的峰最大吸收和主成分的吸收一致。 |
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