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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 质粒转化实验
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甘197

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒转化实验

自己构建的重组质粒转化入BL21，想做原核表达，但是挑菌PCR之后总是发现除了1000+ bp的目的条带之外，还有500+ bp的条带，请问这是怎么回事？做了几次都这样，marker是2000bp的

质粒转化实验


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1楼 2021-07-18 18:14:54
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季末季末

新虫 (正式写手)
引物不特异吧，，你换个引物或者换一个退火温度试一下

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2楼2021-07-19 00:04:42
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甘197

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 季末季末 at 2021-07-19 00:04:42
引物不特异吧，，你换个引物或者换一个退火温度试一下

引物退火温度试过了不行

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3楼2021-07-19 21:07:00
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甘197

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 季末季末 at 2021-07-19 00:04:42
引物不特异吧，，你换个引物或者换一个退火温度试一下

试过了，做的梯度，54度到57度，都有图上的那个杂带

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4楼2021-07-20 19:35:00
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YU_DG

木虫 (正式写手)
做好对照，质粒做正对照，转空载的做副对照，加个水做空白对照。试试

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5楼2021-07-21 11:53:26
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