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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
呵呵,别管它了,直接提取重组的质粒,酶切下看看是不是目的片段,接着往下作......我也出现过类似的状况,转化空质粒结果一个不长,连接的反而长得很好,酶切了10个居然都是阳性的.就没有去重复那个对照了,姑且认为是涂布棒太烫烫死了...

不过楼主的严谨作风织的学习.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2009-08-16 17:56:19
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vivihao

金虫 (小有名气)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
我也在做转BL21   用抽提出来的重组质粒转的,可是转了好几次都没有转成功。。按道理说  用质粒转化的效率应该很高啊,可楞是不长斑,我很郁闷啊,
12楼2009-08-17 13:21:45
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
虽然说BL21的转化效率没有DH5a,Top10等的高,但是10的6次还是有的,自己作的差点10的5次也应该有吧,所以转化应该不是问题的.再试试看吧.
13楼2009-08-17 13:28:08
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yuanfeng

金虫 (小有名气)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
换其他的空载体尝试一下吧,有时候可能质粒自身放久了或其他原因也会出问题。
14楼2009-08-17 16:10:15
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goonhetty

木虫 (小有名气)

谢谢大家!又转了一次还是没成功!先放一下直接做表达吧!
15楼2009-08-18 12:27:21
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-19 13:36
同情一下啊,不知道你涂板用的抗生素是不是加多了,可以适当把抗生素浓度降低些
为梦想努力。
16楼2009-08-18 15:03:17
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goonhetty

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhouzhou_3006 at 2009-8-18 15:03:
同情一下啊,不知道你涂板用的抗生素是不是加多了,可以适当把抗生素浓度降低些

多加5微升或10微升算多吗?
17楼2009-08-19 13:39:57
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
空载体是单酶切还是双酶切,很有可能是自连
18楼2009-08-19 15:47:15
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