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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家帮我看看问题出在哪？质粒转化问题
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
呵呵,别管它了,直接提取重组的质粒,酶切下看看是不是目的片段,接着往下作......我也出现过类似的状况,转化空质粒结果一个不长,连接的反而长得很好,酶切了10个居然都是阳性的.就没有去重复那个对照了,姑且认为是涂布棒太烫烫死了...

不过楼主的严谨作风织的学习.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2009-08-16 17:56:19
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vivihao

金虫 (小有名气)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
我也在做转BL21   用抽提出来的重组质粒转的，可是转了好几次都没有转成功。。按道理说  用质粒转化的效率应该很高啊，可楞是不长斑，我很郁闷啊，
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12楼2009-08-17 13:21:45
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
虽然说BL21的转化效率没有DH5a,Top10等的高,但是10的6次还是有的,自己作的差点10的5次也应该有吧,所以转化应该不是问题的.再试试看吧.
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13楼2009-08-17 13:28:08
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
换其他的空载体尝试一下吧，有时候可能质粒自身放久了或其他原因也会出问题。
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14楼2009-08-17 16:10:15
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goonhetty

木虫 (小有名气)
谢谢大家！又转了一次还是没成功！先放一下直接做表达吧！
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15楼2009-08-18 12:27:21
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-19 13:36
同情一下啊，不知道你涂板用的抗生素是不是加多了，可以适当把抗生素浓度降低些
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为梦想努力。
16楼2009-08-18 15:03:17
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goonhetty

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhouzhou_3006 at 2009-8-18 15:03:
同情一下啊，不知道你涂板用的抗生素是不是加多了，可以适当把抗生素浓度降低些

多加５微升或１０微升算多吗？
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17楼2009-08-19 13:39:57
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
空载体是单酶切还是双酶切，很有可能是自连
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18楼2009-08-19 15:47:15
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