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goonhetty

木虫 (小有名气)

[交流] 大家帮我看看问题出在哪?质粒转化问题

同一批感受态BL21同时转化空载体和带有目的片段的载体,结果空载体没有转化进去,而带有目的片段的载体转化的板子长的非常好。可以肯定感受态没有问题。空载体以前转化过DH5a,转化成功了。现在问题不知道出在哪里,都转化了三次了,不断改变空载体浓度还是没有转化进去!有遇到过这种情况的朋友吗?大家帮我分析一下!

[ Last edited by amisking on 2009-8-16 at 13:51 ]
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:27
呵呵,别管它了,直接提取重组的质粒,酶切下看看是不是目的片段,接着往下作......我也出现过类似的状况,转化空质粒结果一个不长,连接的反而长得很好,酶切了10个居然都是阳性的.就没有去重复那个对照了,姑且认为是涂布棒太烫烫死了...

不过楼主的严谨作风织的学习.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2009-08-16 17:56:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流|! 8-16 13:13
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
断成线状的?
因为带目的基因的那种会加连接酶……

无责任猜测,要不你就试试空载体加连接酶处理了再转化试试
当然你可以完全无视而直接重新抽质粒算了……
2楼2009-08-16 13:05:44
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goonhetty

木虫 (小有名气)

当然不是断成线状的,是完整的空质粒。我现在只有怀疑转化时质粒浓度了,有朋友式因为质粒浓度过高而转化不成功的吗?
3楼2009-08-16 14:33:39
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
无责任猜想:   载体有问题?  空载体自连?   换一批试试。。。。或者感受态其实是有问题的。
4楼2009-08-16 14:58:22
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