应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家帮我看看问题出在哪？质粒转化问题
181/2返回列表12下一页
查看: 911  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

goonhetty

木虫 (小有名气)

[交流] 大家帮我看看问题出在哪？质粒转化问题

同一批感受态BL21同时转化空载体和带有目的片段的载体，结果空载体没有转化进去，而带有目的片段的载体转化的板子长的非常好。可以肯定感受态没有问题。空载体以前转化过DH5a，转化成功了。现在问题不知道出在哪里，都转化了三次了，不断改变空载体浓度还是没有转化进去！有遇到过这种情况的朋友吗？大家帮我分析一下！

[ Last edited by amisking on 2009-8-16 at 13:51 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-16 12:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流|！ 8-16 13:13
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
断成线状的？
因为带目的基因的那种会加连接酶……

无责任猜测，要不你就试试空载体加连接酶处理了再转化试试
当然你可以完全无视而直接重新抽质粒算了……
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-08-16 13:05:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goonhetty

木虫 (小有名气)
当然不是断成线状的，是完整的空质粒。我现在只有怀疑转化时质粒浓度了，有朋友式因为质粒浓度过高而转化不成功的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-08-16 14:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
无责任猜想：   载体有问题？  空载体自连？   换一批试试。。。。或者感受态其实是有问题的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-08-16 14:58:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-16 15:36
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
楼主所谓的空载体是酶切过的吗？ 还是就是完整的双螺旋质粒？
但两者似乎都不可能出现楼主的所说的情况！
而空载体一般式用来做对照的，
楼主既然带目的片段的转进去了，还管空载体干嘛/?
赞一下(7人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
5楼2009-08-16 15:09:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goonhetty

木虫 (小有名气)
空载体就是指的是完整的双螺旋质粒，用来为表达做对照。
赞一下 回复此楼
6楼2009-08-16 15:34:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goonhetty

木虫 (小有名气)
现在可以肯定感受态没有问题，因为带有目的片段的质粒成功转化进去了!
赞一下 回复此楼
7楼2009-08-16 15:36:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimmy7633

木虫 (著名写手)
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
带有目的片段的质粒验证过没？空质粒做个浓度梯度，1倍，10倍，100倍，多涂几个般再试试。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-08-16 15:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 8-18 12:28
引用回帖:
Originally posted by goonhetty at 2009-8-16 15:34:
空载体就是指的是完整的双螺旋质粒，用来为表达做对照。

表面看似乎不可能！不可能转化子的转化效率比阳性还高！
如果楼主的空载体质粒质量可以保证的话，
除了操作差异外，不可能出现这种情况。
难道是目的片段带进去了具有空载体不具有，
而此基因表达的蛋白又是筛选所必须的？
（比如目的基因是某种抗性基因，平板就是带此抗性的）。
其他想不出！
赞一下 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
9楼2009-08-16 15:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goonhetty

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jimmy7633 at 2009-8-16 15:40:
带有目的片段的质粒验证过没？空质粒做个浓度梯度，1倍，10倍，100倍，多涂几个般再试试。

带有目的片段的质粒已经验证过没问题。你说的浓度梯度指的是稀释倍数？
赞一下 回复此楼
10楼2009-08-16 16:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 goonhetty 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭