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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒的试剂盒纯化问题
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主

[交流] 质粒的试剂盒纯化问题

请问，
用试剂盒纯化质粒时，
在加入溶液3后吸取上清带有少量蛋白会对质粒的抽提有影响吗？
我知道手提质粒肯定会有影响，
这里我只是想知道用试剂盒提时会不会把多余的蛋白截留在柱子上，
而对后面的抽提影响不大？
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-08-16 11:17:04
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):是她学我的！！！ 你不信问她! 8-16 11:21
怎么感觉你的头像和  司马诸葛 的一样啊！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
2楼2009-08-16 11:19:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):我也是这么想的 呵呵 8-16 13:22
不要吸太多就没什么问题……
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3楼2009-08-16 13:06:46
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):过两遍？DNA不是截留在柱子上吗 这样有效吗？怎么个两遍法？ 8-16 14:37
你可以把吸取的上清在过柱子的时候过2遍。这样会比较彻底的把蛋白去除。
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4楼2009-08-16 14:11:52
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★ ★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):这样可能能增加DNA的截留率 但可能对蛋白的去除影响不大吧 8-16 14:54
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-16 19:20
就是把上清加到柱子中之后，离心一次，这时候DNA就吸附在柱子上了，而溶液被离心到套着柱子的收集管中了，然后把收集管中的溶液再倒回柱子中再离心一次，以彻底回收DNA。
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5楼2009-08-16 14:47:02
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):什么是去蛋白的液体？大哥 8-16 17:32
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-16 19:20
没有关系，用去蛋白的液体过一边即可，质粒离心的10min改为15min后沉淀就比较彻底了，试剂盒抽提实际上就是溶液1，2，3

[ Last edited by gastrodia on 2009-8-16 at 17:32 ]
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6楼2009-08-16 17:31:21
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
什么是去蛋白的液体？试剂盒中有啊，如果没有的话，你可以使用氯仿酚抽提后再上试剂盒的硅胶柱
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7楼2009-08-16 17:34:00
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-16 19:20
一定不要吸到蛋白沉淀，会堵塞吸附柱，影响提取
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8楼2009-08-16 17:52:02
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-8-16 17:34:
什么是去蛋白的液体？试剂盒中有啊，如果没有的话，你可以使用氯仿酚抽提后再上试剂盒的硅胶柱

是试剂盒里的 洗涤液（wash solution） 吗
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
9楼2009-08-16 18:10:52
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syjxsl

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复离心以便彻底回收DNA
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10楼2009-08-16 20:17:40
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