| 查看: 1386 | 回复: 13 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
a83875785铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
SRB测定和MTT法的问题
|
|||
| 最近提取出来一些单体和混合物，老板让做SRB测定和MTT法测定实验，可是本人是天药专业的，本人或者本实验室从来没有此类实验的经验，也不知道该怎么做，想请问各位大侠们：SRB反应或者MTT实验怎么做，或者哪本书上有介绍这2种实验的做法，不甚感激！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞培养 |
» 猜你喜欢
085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂
已经有3人回复
-
332，085601求调剂
已经有7人回复
-
292求调剂
已经有7人回复
-
314求调剂
已经有17人回复
-
一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂
已经有6人回复
-
291求调剂
已经有8人回复
-
考研二轮调剂
已经有4人回复
-
262求调剂
已经有13人回复
-
调剂
已经有17人回复
-
268分085602化学工程调剂
已经有14人回复
liuliyanemily
木虫 (著名写手)
会飞的虫虫
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3750.5
- 散金: 242
- 红花: 7
- 帖子: 1260
- 在线: 248.5小时
- 虫号: 510672
- 注册: 2008-02-24
- 性别: MM
- 专业: 临床药理
2楼2009-08-16 23:00:36
3楼2009-08-20 10:49:07
tjegg
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 6869.3
- 红花: 16
- 帖子: 2615
- 在线: 448小时
- 虫号: 338983
- 注册: 2007-04-05
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2009-08-20 13:16:42
笨笨猪0608
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 1.643
- 金币: 7585.2
- 红花: 1
- 帖子: 3551
- 在线: 47.1小时
- 虫号: 439613
- 注册: 2007-10-16
- 性别: MM
- 专业: 中药学其他科学问题
5楼2009-08-20 14:31:22
a83875785
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3243.4
- 散金: 6062
- 红花: 3
- 帖子: 1344
- 在线: 419.7小时
- 虫号: 569374
- 注册: 2008-06-05
- 专业: 抗肿瘤药物药理
6楼2009-08-21 09:42:46
笨笨猪0608
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 1.643
- 金币: 7585.2
- 红花: 1
- 帖子: 3551
- 在线: 47.1小时
- 虫号: 439613
- 注册: 2007-10-16
- 性别: MM
- 专业: 中药学其他科学问题
7楼2009-08-21 09:49:53
a83875785
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3243.4
- 散金: 6062
- 红花: 3
- 帖子: 1344
- 在线: 419.7小时
- 虫号: 569374
- 注册: 2008-06-05
- 专业: 抗肿瘤药物药理
8楼2009-08-21 10:48:48
笨笨猪0608
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 1.643
- 金币: 7585.2
- 红花: 1
- 帖子: 3551
- 在线: 47.1小时
- 虫号: 439613
- 注册: 2007-10-16
- 性别: MM
- 专业: 中药学其他科学问题
9楼2009-08-21 14:14:19
★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 8-22 22:11
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 8-22 22:11
|
药物MTT法实验步骤 （1）贴壁细胞： 1: 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔，（细胞浓度的问题见后面的注意事项）。 2: 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午）加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况 3: 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4: 每孔加入10ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。 5: 终止培养，小心吸去孔内培养液。 6: 每孔加入100ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7: 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。 （2）悬浮细胞： 1: 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml（细胞浓度的问题见后面的注意事项），按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100mg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml 1640） 2: 置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值） 4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。 5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。 |
10楼2009-08-22 11:43:32
