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Sephadex G-100凝胶柱使用问题
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小弟最近在做多糖的分级纯化，买了源叶的Sephadex G-100 100g，按照GE的说明书预处理：90℃热水溶胀5小时，待填料静置后将上层碎凝胶弃去。柱子一开始选择是2*100cm的规格（我看的文献大多是用这么长的柱子纯化），将填料倒入柱子，凝胶床高度是80cm，不加压情况下出液口流速越来越慢，甚至一分钟都没有一滴，最后直接不流了。我将凝胶压出又选了一个3*60cm的层析柱，这次大概装了50cm，待液面切平后上样后加蒸馏水洗脱，流速越来越慢，我试着在上面加压（用的那种增氧泵）过了一段时间后凝胶床膨胀到了60cm左右的高度，我赶紧把加压泵撤掉了，随着凝胶膨胀流速也不那么慢了。但是最后显色结果表明多糖没有分开，是一个宽峰。 这两个多糖测GPC显示一个分子量在7000，一个大概是40000，没有分开。 想问下各位大佬们，是哪里出问题了？Sephadex G-100是不耐压、不能装太高吗？但是要获得好的分辨率就必须要把柱子装高，这不就矛盾了吗？我是不是需要加一个恒流泵，来控制流速？谢谢各位。 |
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