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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质小分子结合解析
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质小分子结合解析 已有1人参与

各位大神，小弟最近接触蛋白质小分子相互作用分析，想请教一下用什么方法可以测定蛋白质和小分子如何共价结合？
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1楼 2021-06-30 17:02:30
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)
共价结合？变性胶电泳看条带迁移，或者一级质谱，可以证明共价结合了。二级质谱可以分析结合位点。

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2楼2021-06-30 17:15:24
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pursuream at 2021-06-30 17:15:24
共价结合？变性胶电泳看条带迁移，或者一级质谱，可以证明共价结合了。二级质谱可以分析结合位点。

您好，目前我可以确认是共价结合，我现在想要探究到底结合位点是什么，您讲的二级质谱是？哪里可以测试？
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3楼2021-06-30 17:18:43
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liuchard
引用回帖:
1楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:02:30
各位大神，小弟最近接触蛋白质小分子相互作用分析，想请教一下用什么方法可以测定蛋白质和小分子如何共价结合？

，

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4楼2021-06-30 18:43:20
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yueyanghhh: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2021-07-01 18:28:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:18:43
您好，目前我可以确认是共价结合，我现在想要探究到底结合位点是什么，您讲的二级质谱是？哪里可以测试？...

二级质谱就是将蛋白酶切之后鉴定肽段序列，第一级看肽段总分子量，二级看该肽段断裂之后的碎片，从而鉴定出小分子修饰的位置、理想情况下可以看出具体修饰在哪个氨基酸上面。
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5楼2021-07-01 15:47:21
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:18:43
您好，目前我可以确认是共价结合，我现在想要探究到底结合位点是什么，您讲的二级质谱是？哪里可以测试？...

我是用系里自己的质谱，不对外。您可以看看您所在机构有没有相应的仪器。
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6楼2021-07-01 15:50:10
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pursuream at 2021-07-01 15:47:21
二级质谱就是将蛋白酶切之后鉴定肽段序列，第一级看肽段总分子量，二级看该肽段断裂之后的碎片，从而鉴定出小分子修饰的位置、理想情况下可以看出具体修饰在哪个氨基酸上面。...

好的，谢谢指点。另外，想请教一下您如果小分子和蛋白质是非共价结合，是否能在结合后跑SDS胶，最终还能在目标蛋白胶条中找到小分子？
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7楼2021-07-01 18:28:18
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)
理论上不会，但实际上是有一定可能性的，取决于结合强度。比如streptavidin和biotin的结合，sds-Page也分不开。

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8楼2021-07-01 20:49:07
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pursuream at 2021-07-01 20:49:07
理论上不会，但实际上是有一定可能性的，取决于结合强度。比如streptavidin和biotin的结合，sds-Page也分不开。

好的，谢谢您啦
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9楼2021-07-01 21:57:46
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