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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质小分子结合解析 已有1人参与

各位大神,小弟最近接触蛋白质小分子相互作用分析,想请教一下用什么方法可以测定蛋白质和小分子如何共价结合?
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

共价结合?变性胶电泳看条带迁移,或者一级质谱,可以证明共价结合了。二级质谱可以分析结合位点。

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2楼2021-06-30 17:15:24
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pursuream at 2021-06-30 17:15:24
共价结合?变性胶电泳看条带迁移,或者一级质谱,可以证明共价结合了。二级质谱可以分析结合位点。

您好,目前我可以确认是共价结合,我现在想要探究到底结合位点是什么,您讲的二级质谱是?哪里可以测试?
3楼2021-06-30 17:18:43
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引用回帖:
1楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:02:30
各位大神,小弟最近接触蛋白质小分子相互作用分析,想请教一下用什么方法可以测定蛋白质和小分子如何共价结合?



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4楼2021-06-30 18:43:20
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yueyanghhh: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2021-07-01 18:28:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:18:43
您好,目前我可以确认是共价结合,我现在想要探究到底结合位点是什么,您讲的二级质谱是?哪里可以测试?...

二级质谱就是将蛋白酶切之后鉴定肽段序列,第一级看肽段总分子量,二级看该肽段断裂之后的碎片,从而鉴定出小分子修饰的位置、理想情况下可以看出具体修饰在哪个氨基酸上面。
5楼2021-07-01 15:47:21
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yueyanghhh at 2021-06-30 17:18:43
您好,目前我可以确认是共价结合,我现在想要探究到底结合位点是什么,您讲的二级质谱是?哪里可以测试?...

我是用系里自己的质谱,不对外。您可以看看您所在机构有没有相应的仪器。
6楼2021-07-01 15:50:10
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pursuream at 2021-07-01 15:47:21
二级质谱就是将蛋白酶切之后鉴定肽段序列,第一级看肽段总分子量,二级看该肽段断裂之后的碎片,从而鉴定出小分子修饰的位置、理想情况下可以看出具体修饰在哪个氨基酸上面。...

好的,谢谢指点。另外,想请教一下您如果小分子和蛋白质是非共价结合,是否能在结合后跑SDS胶,最终还能在目标蛋白胶条中找到小分子?
7楼2021-07-01 18:28:18
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

理论上不会,但实际上是有一定可能性的,取决于结合强度。比如streptavidin和biotin的结合,sds-Page也分不开。

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8楼2021-07-01 20:49:07
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yueyanghhh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pursuream at 2021-07-01 20:49:07
理论上不会,但实际上是有一定可能性的,取决于结合强度。比如streptavidin和biotin的结合,sds-Page也分不开。

好的,谢谢您啦
9楼2021-07-01 21:57:46
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