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zzy124

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】急求各位色谱高手:怎样才能将柱压降下来?

我用的是安捷伦的柱子,以前用纯甲醇冲时,只有40多,做过血样后就变成130多,已经连续冲了好几天了,降到90多,就一直下不来,求各位高手帮帮忙!
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djc9801

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zzy124(金币+10,VIP+0): 8-15 10:02
反相柱(C18, C12, C8, C4, C2, C1, 苯基)的清洗

1. 使用完色谱柱后,建议以下列溶剂各10倍柱体积清洗:
95%水/5%乙腈 (去除缓冲盐,非盐流动相可省略)
梯度到95%乙腈/5%水 (去除强保留物质)
(对250*4.6mm柱子, 0.5mL/min冲洗90min)

2. 长期使用后发现柱效、分离度明显下降,以下列溶剂各10倍柱体积清洗:
95%水/5%乙腈
四氢呋喃或异丙醇
95%乙腈/5%水

若以上方法无效,可能是柱头污染了,反接色谱柱,以下溶剂各10倍柱体积清洗:
95%水/5%乙腈
95%乙腈/5%水(建议流速为0.2mL/min,冲洗过夜,除去柱头污染物),若无效,用四氢呋喃或异丙醇反冲

3. 若上述方法仍然无效,建议再生色谱柱(但不保证有效):
甲醇-异丙醇-正己烷(30倍柱体积,对250*4.6mm柱子, 0.5mL/min冲洗3h)-异丙醇-甲醇

4. 注意:建议使用保护柱,而且经常更保护柱芯,否则柱芯拦截作用达饱和后其杂质会透过柱芯进入色谱柱中,从而缩短柱寿命!
5楼2009-08-15 00:04:00
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普通回帖

yomo

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
zzy124(金币+5,VIP+0): 8-14 22:30
zzy124(金币+1,VIP+0): 8-15 22:33
柱子堵了,实在没办法的话,把柱子倒过来冲,最好先看看是什么类型的物质堵了,用相对应好溶的溶剂或水冲
2楼2009-08-14 22:26:34
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jian_young

银虫 (初入文坛)


zzy124(金币+1,VIP+0): 8-15 22:33
确定你的其他的地方没堵??
3楼2009-08-14 23:25:09
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i168

金虫 (著名写手)


zzy124(金币+1,VIP+0): 8-15 22:33
做了多少血样?血样没有稀释离心过滤吗?
换用乙腈水溶液冲洗看看
4楼2009-08-14 23:38:38
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donzen1981

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
zzy124(金币+5,VIP+0): 8-15 22:34
引用回帖:
Originally posted by djc9801 at 2009-8-15 00:04:
反相柱(C18, C12, C8, C4, C2, C1, 苯基)的清洗

1. 使用完色谱柱后,建议以下列溶剂各10倍柱体积清洗:
95%水/5%乙腈 (去除缓冲盐,非盐流动相可省略)
梯度到95%乙腈/5%水 (去除强保留物质)
(对250* ...

楼上说的有道理
6楼2009-08-15 11:17:05
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chinabull

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
zzy124(金币+5,VIP+0): 8-15 22:34
按照色谱柱再生的方法试试看,实在不行可以把柱子柱头卸下来,把塞板超声处理一下,柱压高主要还是塞板堵了。
7楼2009-08-15 11:51:25
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zzy124

银虫 (小有名气)

再请教一下

我今天把柱子反过来用95%的乙腈冲了。柱压确实降下来了。但是最后换过来时,柱压有升上去了。这可咋办呢?
8楼2009-08-15 22:40:25
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yomo

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
zzy124(金币+5,VIP+0): 8-17 22:44
增加冲的时间,尽可能的长,看看能不能把压力降下来,如果有与柱相同的填料的话,把柱子拧开,挖掉部分填料,并填补,有新柱塞的话换掉。
9楼2009-08-17 19:48:59
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chuchengliang

银虫 (小有名气)


zzy124(金币+1):谢谢参与
柱压高是经常遇到的现象,但不一定就是柱子赌了,柱子尽量不要反冲
柱压高可能的原因:1、仪器管路被堵
2、流动相没有过滤干净
3、在换流动相之前可以想用不含盐的流动相过渡,避免流动相中的盐遇到高浓度的甲醇会析出
4,样品会不会与流动相发生反应
样品如果含有蛋白遇到高浓度甲醇或乙腈也可能会变性析出的
10楼2009-08-18 23:31:30
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