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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 不长菌落怎么办？
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yoyoyehan

[交流] 不长菌落怎么办？

各位虫友，我现在做转化试验，目的是测序，可是做的LB培养基不长菌落，怎么办？ 用的是上海生工的DH5α，连接片段1000bp左右，
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1楼 2009-08-14 15:32:16
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0):奖励一下 8-14 18:58
引用回帖:
Originally posted by yoyoyehan at 2009-8-14 15:32:
各位虫友，我现在做转化试验，目的是测序，可是做的LB培养基不长菌落，怎么办？ 用的是上海生工的DH5α，连接片段1000bp左右，

1.抗生素浓度是否太高；
2.感受态细胞是否存活，感受态效率是否正常，可以转化未连接目的片段的空载体试试；
3.涂布时是否把菌烫死
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2楼2009-08-14 18:01:01
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
看活性好不好。
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3楼2009-08-14 19:08:30
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接确定没有出问题么?转化不出东西多半是连接那步出问题了.试着作几个对照看看是哪里的问题.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-14 19:14:41
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
重新做，做的时候做个空质粒转化的对照
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5楼2009-08-15 11:45:18
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rural2084

木虫 (正式写手)
估计是连接出问题了，如果用的是连接试剂盒，连接温度不要太高，25度就行
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6楼2009-08-16 18:04:14
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vivihao

金虫 (小有名气)
★
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可能是连接或转化方面出了问题。连接成功与否不好验证，只有通过转化后图板，挑斑PCR与酶切后才能知道。而转化出现问题可以直接做个对照，用空质粒转化，验证感受态是否有问题。建议先做个对照，验证感受态有没有问题。
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7楼2009-08-18 13:06:01
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