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yoyoyehan

[交流] 不长菌落怎么办?

各位虫友,我现在做转化试验,目的是测序,可是做的LB培养基不长菌落,怎么办? 用的是上海生工的DH5α,连接片段1000bp左右,
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smallcat227

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):奖励一下 8-14 18:58
引用回帖:
Originally posted by yoyoyehan at 2009-8-14 15:32:
各位虫友,我现在做转化试验,目的是测序,可是做的LB培养基不长菌落,怎么办? 用的是上海生工的DH5α,连接片段1000bp左右,

1.抗生素浓度是否太高;
2.感受态细胞是否存活,感受态效率是否正常,可以转化未连接目的片段的空载体试试;
3.涂布时是否把菌烫死
2楼2009-08-14 18:01:01
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

看活性好不好。
3楼2009-08-14 19:08:30
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接确定没有出问题么?转化不出东西多半是连接那步出问题了.试着作几个对照看看是哪里的问题.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-14 19:14:41
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
重新做,做的时候做个空质粒转化的对照
5楼2009-08-15 11:45:18
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rural2084

木虫 (正式写手)

估计是连接出问题了,如果用的是连接试剂盒,连接温度不要太高,25度就行
6楼2009-08-16 18:04:14
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vivihao

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是连接或转化方面出了问题。连接成功与否不好验证,只有通过转化后图板,挑斑PCR与酶切后才能知道。而转化出现问题可以直接做个对照,用空质粒转化,验证感受态是否有问题。建议先做个对照,验证感受态有没有问题。
7楼2009-08-18 13:06:01
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