| 查看: 1109 | 回复: 2 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者木查yan将赠送您 10 个金币 | ||
[求助]
引物设计 已有2人参与
|
||
|
本人做转化 设计好的引物本想扩增载体里基因的序列 但是没转的阴性对照也显示出条带 想问下大家 应该怎么设计引物能避免这种情况发生呢 谢谢啦 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
由于看不到你pcr的电泳图，不清楚阴性对照有条带是什么样子？大小是多少？和目的条带一样么？条带的浓度和清晰度如何？ 因为如果是以质粒为模板进行PCR ，出现非特异性条带的概率还是比较低的，即相对于基因组做模板，质粒模板对引物的质量要求不是特别高，一般都可以很好的获得特异性目的条带。 出现你这种情况，可以试着分析： 1、对比阴性对照和实验组，pcr获得条带是否一样？获得的条带是目的条带还是非特异性条带？有没有可能没有获得目的条带，而是引物二聚体？（可增加不加引物的阴性对照）。 2、确定模板正常，阴性对照使用的水是否有污染？实验组使用的质粒浓度如何？配制体系时候是否有交叉污染的可能？ 3、引物设计是以质粒载体为模板设计的？还是以基因组模板设计，然后用质粒扩增？按道理质粒大小一般在10K以下，这么小的模板出现非特异性的概率还是比较低的，除非你的引物质量太差，或者加入酶切位点后导致引物质量下降？ 最好可以放一张电泳图供参考，祝好！ |
2楼2021-06-18 08:44:06
3楼2021-07-09 14:53:47