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abcjlm铜虫 (小有名气)
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发酵液过滤 已有1人参与
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| 使用BL21表达菌株，5L发酵罐发酵，离心收集菌体，使用高压均质机破碎，离心收集上清，但是发现上清液很难使用0.45um膜过滤，已经使用10000g离心了，细胞碎片已经被离下去了，咋怎么难过滤？是发酵液菌体死亡的原因，还是均质过程的原因？急急急 |
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abcjlm
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4楼2021-06-16 14:14:59
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【答案】应助回帖
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不清楚你用0.45μm过滤的目的是什么，我们通常离心收集上清后即可进行下一步的操作。 大肠杆菌发酵菌体破碎后，上清液看似清亮（有的时候破碎液粘度大，离心分离也很难拿到清亮的上清液），里面除了一部分可溶性蛋白外，还有破壁后大肠杆菌的一些核酸等物质，这些蛋白和核酸使得上清液不像纯化水一样，是具有一定的粘性的，所以在进行膜过滤的时候很难过滤。 如果你的重组蛋白在上清中，又必须经过0.45μm的膜过滤，可以尝试在膜过滤前对上清液进行低浓度的盐析处理，比如用硫酸铵沉淀的方法将上清液中一些杂蛋白提前除去一部分，这样重新离心获得的上清会比较容易过滤（使用硫酸铵沉淀技术，应该提前进行小试实验，确定硫酸铵的使用饱和度，避免目标重组蛋白的损失）。 祝好！ |
2楼2021-06-16 13:55:54
原海亮
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3楼2021-06-16 13:58:05
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5楼2021-06-16 14:17:06
