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abcjlm

铜虫 (小有名气)

[求助] 发酵液过滤 已有1人参与

使用BL21表达菌株,5L发酵罐发酵,离心收集菌体,使用高压均质机破碎,离心收集上清,但是发现上清液很难使用0.45um膜过滤,已经使用10000g离心了,细胞碎片已经被离下去了,咋怎么难过滤?是发酵液菌体死亡的原因,还是均质过程的原因?急急急
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有一种愿意可能是破碎的不彻底,可以进行二次的高压均质破碎,这样获得的破碎液的粘稠度会明显比一次破碎的降低。
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2021-06-16 13:58:05
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不清楚你用0.45μm过滤的目的是什么,我们通常离心收集上清后即可进行下一步的操作。

       大肠杆菌发酵菌体破碎后,上清液看似清亮(有的时候破碎液粘度大,离心分离也很难拿到清亮的上清液),里面除了一部分可溶性蛋白外,还有破壁后大肠杆菌的一些核酸等物质,这些蛋白和核酸使得上清液不像纯化水一样,是具有一定的粘性的,所以在进行膜过滤的时候很难过滤。

       如果你的重组蛋白在上清中,又必须经过0.45μm的膜过滤,可以尝试在膜过滤前对上清液进行低浓度的盐析处理,比如用硫酸铵沉淀的方法将上清液中一些杂蛋白提前除去一部分,这样重新离心获得的上清会比较容易过滤(使用硫酸铵沉淀技术,应该提前进行小试实验,确定硫酸铵的使用饱和度,避免目标重组蛋白的损失)。

       祝好!
天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2021-06-16 13:55:54
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abcjlm

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2021-06-16 13:58:05
还有一种愿意可能是破碎的不彻底,可以进行二次的高压均质破碎,这样获得的破碎液的粘稠度会明显比一次破碎的降低。

AKTA  纯化
4楼2021-06-16 14:14:59
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abcjlm

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by abcjlm at 2021-06-16 14:14:59
AKTA  纯化...

过镍柱
5楼2021-06-16 14:17:06
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