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greatsaint

银虫 (小有名气)

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[交流] 质粒电泳会出现几条带

我先前做了pcr片段的克隆，对阳性克隆扩大培养并提取质粒，然后跑电泳，只出现一条带。我的质粒大约5kbp。我看有资料说由于质粒构象的不同可能会出现三条带或更多。提取质粒后电泳到底会出现几条带？我这里出现了一条带正常吗？

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1楼2009-08-13 17:38:09

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-17 20:19

上面是电泳过程中产生的变化。下面查到在质粒提取过程中发生的变化，不知道哪种更可信一些？

用酚、氯仿法从工程菌中提取的质粒一般有三种构像，即超螺旋，线形和开环。（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。

判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。因为用质粒转染真核细胞时，超螺旋的质粒效率最高，所以要求质粒中超螺旋质粒的含量要在90％以上，这也是对作为核酸疫苗重组质粒的要求。
根据我做实验的经验，回答你的问题
1 从细菌中大量提取的质粒电泳时，不一定均出现三条带，有时会出现两条，甚至一条(一般是超螺旋的质粒)，这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤，超螺旋的质粒会较多。
2 酶切将质粒线性化以后，才可以用mark判断大小。如果有三种构像，可以用中间那条带与mark比较判断大小。
3 商品化的质粒我没有直接跑过电泳。我估计应该大部分是超螺旋构像。
4 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小。