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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞培养：消化液中0.53mM的EDTA如何配制？
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 细胞培养：消化液中0.53mM的EDTA如何配制？

我想请教下：
1.消化液中0.53mM的EDTA的配方？（我买的是EDTA.2NA）（是用PBS还是三蒸水配制？）
2.配制消化液时，是将胰酶和EDTA一起混合配制，还是将胰酶和   EDTA分别配制后，使用时再1：1混合啊？
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1楼 2009-08-13 17:32:32
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wylcyy

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
richenim(金币+1,VIP+0): 8-15 09:25
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-15 10:01
1、用PBS配制；
2、配置后在混匀，防止局部浓度过高。
现在试剂公司一般都有配制好的现成的胰酶-EDTA卖
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2楼2009-08-14 14:36:30
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wylcyy at 2009-8-14 14:36:
1、用PBS配制；
2、配置后在混匀，防止局部浓度过高。
现在试剂公司一般都有配制好的现成的胰酶-EDTA卖

比如我是0.25%胰酶溶解在100ml的PBS中，0.53mM的EDTA溶解在100ml的PBS中,若配制后再混匀，那胰酶和DETA的浓度不就是都改变了吗？
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3楼2009-08-15 09:30:09
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
richenim(金币+1,VIP+0): 8-15 14:20
amisking(金币+2,VIP+0): 8-15 15:08
1.先用PBS配制0.5M或4%的EDTA溶液及胰酶浓溶液
2.根据最后稀配的总体积,计算出要加多少体积0.5M或4%EDTA及胰酶浓溶液
3.吸取EDTA及胰酶浓溶液,最后用PBS定容至所需总体积.
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4楼2009-08-15 10:19:56
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ljsh at 2009-8-15 10:19:
1.先用PBS配制0.5M或4%的EDTA溶液及胰酶浓溶液
2.根据最后稀配的总体积,计算出要加多少体积0.5M或4%EDTA及胰酶浓溶液
3.吸取EDTA及胰酶浓溶液,最后用PBS定容至所需总体积.

比如我要配制消化液100ml,那所需胰酶0.25g，和EDTA 0.02g ，那就是分别用少量的PBS溶解0.25g的胰酶和0.02gEDTA,然后混匀后定容至100ml，这样是对的吗？
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5楼2009-08-15 14:29:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 8-15 15:08
richenim(金币+1,VIP+0): 8-15 15:34
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2009/8/15, 14:29:


比如我要配制消化液100ml,那所需胰酶0.25g，和EDTA 0.02g ，那就是分别用少量的PBS溶解0.25g的胰酶和0.02gEDTA,然后混匀后定容至100ml，这样是对的吗？

对，不定容也可以的~~
这种粗放的操作没必要那么精确
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6楼2009-08-15 14:50:02
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-8-15 14:50:


对，不定容也可以的~~
这种粗放的操作没必要那么精确

哦，谢谢！
我再请教下，为什么有些消化液的配方还需要加葡萄糖和碳酸氢钠啊？有没有一个准确的消化液配方啊？（我要配的是0.25%胰酶—0.53mM EDTA，我用的是EDTA2Na）  
谢谢！
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7楼2009-08-15 15:38:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
richenim(金币+1,VIP+0): 8-15 21:18
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2009/8/15, 15:38:


哦，谢谢！
我再请教下，为什么有些消化液的配方还需要加葡萄糖和碳酸氢钠啊？有没有一个准确的消化液配方啊？（我要配的是0.25%胰酶—0.53mM EDTA，我用的是EDTA2Na）  
谢谢！

不需要再加入这两种物质，可能是对于一些比较脆弱的细胞才需要吧，我们养原代神经元都不用，只需PBS配
带不带Na其实真的一点所谓都没有……照样可以做出实验，照样可以发文章。分子、细胞生物学的东西，只要结果可靠能重复，那些配方、步骤其实都可以在不违背基本原则的基础上根据实际情况合理更改~
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8楼2009-08-15 16:51:57
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-8-15 16:51:


不需要再加入这两种物质，可能是对于一些比较脆弱的细胞才需要吧，我们养原代神经元都不用，只需PBS配
带不带Na其实真的一点所谓都没有……照样可以做出实验，照样可以发文章。分子、细胞生物学的东西，只要 ...

哦，谢谢了！
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9楼2009-08-15 21:19:04
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