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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建质粒，目的基因前加信号肽导致目的基因缺失或大肠杆菌致死
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张小蛋

新虫 (小有名气)

[求助] 构建质粒，目的基因前加信号肽导致目的基因缺失或大肠杆菌致死 已有1人参与

发现了有趣的现象
在构建质粒过程中，在目的基因前加信号肽导致会目的基因序列缺失或大肠杆菌致死，大家有没有遇到这样的情况？或者大概分析一下可能是哪些原因呢？
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1楼 2021-06-09 18:29:34
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2021-06-10 10:35:29
基因缺失或致死是因为细胞毒性么？有点好奇是什么基因，分泌到periplasm还是到培养基里？

可能原因很多，比如在胞内无法正确折叠，不会致死，但是加了信号肽，能正确折叠了，毒性就出来了，，，

表达的ccdB毒蛋白基因，这个基因在DB3.1菌株里面是不致死的，但是加了信号肽之后，测序发现ccdB基因发生了缺失，那可能是由于信号肽的存在，导致毒性增强了？
还有就是又克隆了一个普通的酶，以信号肽+酶的形式构建质粒，这个质粒就构建不出来了，涂抹到平板上是不长的出现了致死的现象，觉得很奇怪
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3楼2021-06-15 10:20:54
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因缺失或致死是因为细胞毒性么？有点好奇是什么基因，分泌到periplasm还是到培养基里？

可能原因很多，比如在胞内无法正确折叠，不会致死，但是加了信号肽，能正确折叠了，毒性就出来了，，，
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2021-06-10 10:35:29
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

ccdB蛋白的毒性作用是通过与促旋酶GyrA亚基第462位氨基酸相结合使得DNA断裂后不能进行修复，DNA合成受阻，导致细胞死亡。

DB3.1菌株的细胞含有gyrA462基因，能够表达GyrA亚基蛋白与ccdB结合的区域，可以竞争性抑制ccdB蛋白的活性，使得促旋酶可以正常行使功能，实现含有ccdB的载体的正常扩增。

-------------------------以上转自豆丁

根据以上信息, 是不是可以理解为信号肽可能是ccdB蛋白在空间上逃逸GyrA的结合, 从而致死(这只是推测, 可能性之一吧)
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2021-06-15 21:53:22
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