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喵七姑娘

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[求助] 求助跑胶老在孔里是啥原因啊已有1人参与

之前跑胶没有问题，怎么最近老出现在孔里很亮的现象啊，第3，4孔，有知道的小伙伴吗？拜托了

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端

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1楼2021-06-04 10:03:50

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原海亮

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【答案】应助回帖

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首先，你应该分析的是，经常出现这样异常现象是哪一类样品？是pcr产物？是质粒酶切？是基因组DNA？还是无论什么样品都会出现这种现象呢？

   因为不知道你有问题的样品是什么，但从你的胶图上看，marker和其他样品均还是可以正常的迁移，证明琼脂糖凝胶应该没大问题（为保险也可所有缓冲液都换新的尝试）。

   那么推测，你最近出现这种现象的样品应该是只有某一种类型的样品，而且大概率是抽提的质粒或者基因组DNA，比如3/4泳道的问题，大概率是你上样样品本身的问题，可以考虑是不是样品提取处理的时候，有一些溶剂的残留或者蛋白质的残留，可以多加一步除蛋白的步骤，降低样品粘度，应该会有一些缓解。

   同时，如果你的样品本身分子量就比较大，比如基因组DNA，迁移速度很慢的，就有可能在你marker或其他小分子样品已经分布开时，这类大分子的样品还停留在样品孔附近，按照大分子迁移慢的逻辑，这属于正常的现象。当然如果想解决这类大分子DNA检测问题，你可以尝试降低一些琼脂糖凝胶的浓度（浓度高分辨率高，但不利于大分子分离，应根据样品的大小选择合适浓度），增加一下胶的长度和电泳时间，这样有助于大分子DNA的迁移分离，同时适当降低上样量可能会拿到一个相对漂亮一些的结果。

   祝好！