| 查看: 2989 | 回复: 41 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
feitiannongying铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
原核表达及诱导
|
||
|
导师给的课题是将拟南芥一个膜蛋白基因构建到原核表达载体进行体外诱导表达。我用的表达载体是pET30a，然后转到BL21（DE3）中进行诱导表达。在BL21（DE3）中进行诱导表达时，诱导时间用过3h、4h、5h、6h、8h，IPTG浓度用过15uM 、300uM 、500uM 、800uM、1000uM的，温度是37℃，转速是200 rpm左右；在BL21（DE3）pLysS中进行诱导表达时，诱导时间用过4h、6h、，IPTG浓度用过15uM 、500uM 、1000uM的，温度是37℃，转速是200 rpm左右；在这两种宿主菌中诱导后跑SDS-PAGE发现转化子的和空载体的跑出的条带没有任何差别。重组载体没问题，测序正确并且没有移码。 从今年的3月份实习一直到现在我都在做这个课题，从一开始实验就很不顺利，到七月份才做到原核表达，而到现在还没表达出来，真的快要疯了，恳请有经验的师兄师姐给指点一下。谢谢！！ [ Last edited by amisking on 2009-8-18 at 22:12 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有56人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有13人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有6人回复
2004371310
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9194
- 散金: 2
- 红花: 1
- 帖子: 2157
- 在线: 213.4小时
- 虫号: 596733
- 注册: 2008-09-09
- 专业: 食品科学基础
3楼2009-08-13 10:39:38
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2009-08-13 09:52:06
zhuangyu8188
铁虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4668.7
- 帖子: 131
- 在线: 36.6小时
- 虫号: 703686
- 注册: 2009-02-18
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2009-08-13 10:53:32
5楼2009-08-13 10:56:17
