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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 过表达做验证
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量大_农民

新虫 (初入文坛)

[求助] 过表达做验证 已有2人参与

做过表达，转化到大肠杆菌，板子上能长菌，但是挑了菌，想做一下连接的验证，发现竟然跑不出条带，这是咋回事呀

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1楼 2021-05-25 09:53:33
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321hanxiao

新虫 (初入文坛)
培养基中加氨苄了吗？

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3楼2021-06-01 10:04:01
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fcesfd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做蓝白斑实验，挑选转化成功的菌群，摇菌培养后提取DNA，再PCR。
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2楼2021-05-31 14:33:12
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你的问题描述比较简单，是要在大肠杆菌中过表达某基因么？还是用大肠杆菌做亚克隆？转化进大肠杆菌的是游离性载体还是整合型的？

       连接验证使用的是什么方法呢？PCR或者酶切？

       抗性筛选的情况下有菌生长，但是没有目的条带，多半是一些空载体造成的假阳性，应该从片段处理、载体处理、连接转化、阳性筛选方法进行全面的分析来解决问题，祝好！
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2021-06-01 16:52:03
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