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量大_农民

新虫 (初入文坛)

[求助] 过表达做验证 已有2人参与

做过表达,转化到大肠杆菌,板子上能长菌,但是挑了菌,想做一下连接的验证,发现竟然跑不出条带,这是咋回事呀

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fcesfd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做蓝白斑实验,挑选转化成功的菌群,摇菌培养后提取DNA,再PCR。
2楼2021-05-31 14:33:12
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321hanxiao

新虫 (初入文坛)

3楼2021-06-01 10:04:01
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你的问题描述比较简单,是要在大肠杆菌中过表达某基因么?还是用大肠杆菌做亚克隆?转化进大肠杆菌的是游离性载体还是整合型的?

       连接验证使用的是什么方法呢?PCR或者酶切?

       抗性筛选的情况下有菌生长,但是没有目的条带,多半是一些空载体造成的假阳性,应该从片段处理、载体处理、连接转化、阳性筛选方法进行全面的分析来解决问题,祝好!
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2021-06-01 16:52:03
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