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abcdeojg

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子小白!求助 已有1人参与

现在需要敲除酵母的一个基因,同源重组的方法。问题1.必须用质粒敲吗?可以用片段来敲吗?2. 想做这个基因上下游的引物,我要怎么才能找到这个基因上下游的序列呢?感激感激!

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cTiyAmo

新虫 (初入文坛)

同学您好,请问您还在继续这个课题吗

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4楼2022-03-02 09:49:55
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泡沫12

新虫 (小有名气)

可以用同片段的方式。两端加同源臂

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2楼2021-05-19 18:08:16
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先,你要清楚质粒的作用是什么,在大部分情况下,质粒就是我们说的载体,重组载体是将宿主适用的质粒和基因片段连接在一起的环状DNA,质粒的作用就是一个运输的工具,将你的片段带入到酵母体内,同时质粒会携带一些在酵母体复制表达、位点识别、基因重组所需的基因元件及抗性筛选元件,可以让你的基因片段进入酵母细胞内正常的复制和发挥作用,单独的一个基因片段无法进入酵母细胞,更不要说发挥作用了。就类似运载火箭和卫星的关系,没有火箭,卫星再高级也进入不到轨道发挥作用。

      其次,你目的基因的序列应该是知道的,对于他上下游的序列,你可以到数据库里面去找到基因组序列,选择你目的基因位置后,前后的序列就是你需要找到的。
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2021-06-01 17:41:22
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