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现在需要敲除酵母的一个基因，同源重组的方法。问题1.必须用质粒敲吗？可以用片段来敲吗？2. 想做这个基因上下游的引物，我要怎么才能找到这个基因上下游的序列呢？感激感激！ 发自小木虫IOS客户端 |
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【答案】应助回帖
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首先，你要清楚质粒的作用是什么，在大部分情况下，质粒就是我们说的载体，重组载体是将宿主适用的质粒和基因片段连接在一起的环状DNA，质粒的作用就是一个运输的工具，将你的片段带入到酵母体内，同时质粒会携带一些在酵母体复制表达、位点识别、基因重组所需的基因元件及抗性筛选元件，可以让你的基因片段进入酵母细胞内正常的复制和发挥作用，单独的一个基因片段无法进入酵母细胞，更不要说发挥作用了。就类似运载火箭和卫星的关系，没有火箭，卫星再高级也进入不到轨道发挥作用。 其次，你目的基因的序列应该是知道的，对于他上下游的序列，你可以到数据库里面去找到基因组序列，选择你目的基因位置后，前后的序列就是你需要找到的。 |
3楼2021-06-01 17:41:22
4楼2022-03-02 09:49:55
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