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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 肝癌细胞系转染
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沐夕微暖

新虫 (小有名气)

[求助] 肝癌细胞系转染 已有1人参与

请问各位虫友，1.肝癌细胞Huh7，hepG2系做8kb以上带GFP的质粒转染（用的lipo2000），1-2天后观察几乎没有绿色荧光，是因为质粒太大了么？我以前转染4kb的GFP质粒，Huh7效率达到80%，hepG2达到30%。
2. 依然是这两个细胞系，用lipo2000做siRNA转染，转染前细胞密度50%，转染后细胞状态挺好的，12h后显微镜下观察带有FAM荧光基团的siRNA的转染效率，如图（HepG2）都是点状荧光，细胞没有整体变绿，是因为转染效率太低了么（huh7也差不多是这样）？要怎么样才能提高转染效率呢？请各位虫友不吝赐教，万分感激！

@gyesang 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2021-05-13 19:45:53
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沐夕微暖

新虫 (小有名气)
肝癌细胞系转染

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2楼2021-05-13 19:46:41
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
你这荧光显微镜背景有点儿高，考虑这个质粒的GFP可能表达量不是很高，在这种背景下看不出来
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2021-05-14 10:04:38
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辛夷?

新虫 (初入文坛)
我的si也是这样，也做了hep，楼主后来成功了吗？能分享下经验吗

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4楼2023-06-28 10:37:22
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

细胞状态怎么样？调整好细胞转态，要不就换了转染方式，使用慢病毒转染或者质粒电转
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5楼2023-08-12 17:31:31
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