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沐夕微暖

新虫 (小有名气)

[求助] 肝癌细胞系转染 已有1人参与

请问各位虫友,1.肝癌细胞Huh7,hepG2系做8kb以上带GFP的质粒转染(用的lipo2000),1-2天后观察几乎没有绿色荧光,是因为质粒太大了么?我以前转染4kb的GFP质粒,Huh7效率达到80%,hepG2达到30%。
2. 依然是这两个细胞系,用lipo2000做siRNA转染,转染前细胞密度50%,转染后细胞状态挺好的,12h后显微镜下观察带有FAM荧光基团的siRNA的转染效率,如图(HepG2)都是点状荧光,细胞没有整体变绿,是因为转染效率太低了么(huh7也差不多是这样)?要怎么样才能提高转染效率呢?请各位虫友不吝赐教,万分感激!

@gyesang 发自小木虫IOS客户端
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沐夕微暖

新虫 (小有名气)

2楼2021-05-13 19:46:41
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

你这荧光显微镜背景有点儿高,考虑这个质粒的GFP可能表达量不是很高,在这种背景下看不出来
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2021-05-14 10:04:38
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辛夷?

新虫 (初入文坛)

我的si也是这样,也做了hep,楼主后来成功了吗?能分享下经验吗

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4楼2023-06-28 10:37:22
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

细胞状态怎么样?调整好细胞转态,要不就换了转染方式,使用慢病毒转染或者质粒电转
5楼2023-08-12 17:31:31
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