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gxiaoyao

金虫 (小有名气)

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[求助] 2000bp的碱基缺失后还能回复突变吗?

最近遇到了一怪事:
敲除了某细菌的一个ORF菌落PCR检测和DNA测序证明是正确的敲除菌株，当将正确的单菌落接至LB中培养后进行菌液PCR检测发现有微弱的条带和阳对(出发菌株)一样。开始怀疑是敲除菌株里混有未敲除菌株，所以对刚检测过的菌液再进行平板划线、挑单。再进行菌落PCR检测，发现了好多单菌落都P出了微弱的条带和阳对一样，挑没有出现和阳对一样DNA条带的单菌落再接至LB中培养，再进行菌液PCR检测，又P出了微弱的DNA条带和阳对一样!
如果说是敲除菌株中混有没敲除的菌株，那在我反复分单的情况下肯定会得到纯的敲除菌株。然而事实是我连续分单了2次后分别进行菌落PCR和菌液PCR检测，菌落PCR检测是正确的敲除菌株，相同的菌落在LB液体里生长后在菌液PCR检测就会发现它不完全是正确的敲除菌株。
你们有碰到相似情况吗?我可以将这种现象归结为敲除菌株的回复突变吗?我知道一两个碱基突变后可以发生回复突变，2000bp的碱基缺失后还能回复突变吗?

之前有看到虫友发了类似的帖子，不知道现在解决了吗，欢迎回帖啊

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1楼 2021-05-10 17:45:42

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slcat

新虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wolfghost: 金币+2, 积极应助奖励~ 2021-05-12 17:28:27
gxiaoyao(qfw_68代发): 金币+5 2021-05-25 15:42:27
qfw_68: 博学EPI+1, 积极应助奖励！ 2021-05-25 15:42:39

有没有可能是非特异性条带？可以重新设计被敲除片段内部的引物进行PCR验证，或者把该条带回收测序验证

发自小木虫Android客户端