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药化小菜鸡

新虫 (初入文坛)

[求助] 药动学求助

标曲浓度点的确定:
大鼠给药方案是 将规格为1mg/ml的药物,根据大鼠体重按照5ml/kg进行尾静脉注射给药(一共三种药物A,B C),理想状态下,一只大鼠最重约300g,给药量最大=0.3kg*5ml*1mg/ml=1.5mg,大鼠体内全部血液视为15ml,即最高血药浓度为1.5mg/15ml=0.1mg/ml。
根据药物非临床药代动力学研究技术指导原则,标曲的线性范围应该包括5个半衰期浓度,故标曲浓度设置如下:
0.2mg/ml(200ppm)、0.1mg/ml(100ppm)、0.05 mg/ml(50ppm)、 0.02 mg/ml(20ppm)、0.01 mg/ml(10ppm)、0.005 mg/ml(5ppm)、0.002 mg/ml(2ppm)、0.001 mg/ml(1ppm).
浓度太大,仪器(安捷伦6460)不敢进这么大的浓度,因此需要稀释标曲倍数:
稀释标曲100倍:
2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm
那么血样我们需要怎么处理才能满足稀释100倍呢?
方案一:取10ul样本血样,加空白血990ul,得稀释100倍后的血样,然后取稀释后的血样100ul, 加入A、B、C药物对照品溶液各10ul,加入内标IS 10ul, 再加入乙腈260ul,沉淀蛋白,涡旋3min,再12000r/min 高速离心10min,取上清液进样。
如果按照上述方案进行,样本血样加空白血稀释了100倍之后,再加乙腈沉淀蛋白(此处稀释了4倍),那么样本的稀释倍数是不是变成了400倍?
方案二: 取10ul样本血样,加空白血240ul,得稀释25倍的血样,然后取上述所得血样100ul, 加入A、B、C药物对照品溶液各10ul,加入内标IS 10ul, 再加入乙腈260ul,沉淀蛋白,涡旋3min,再12000r/min 高速离心10min,取上清液进样。
如果按照方案二,是血样用空白血稀释了25倍,前处理乙腈稀释了4倍,共100倍
请问老师,这两种稀释方案哪种可行吗?如果都不可行,求老师指导!谢谢老师
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panyuanfu

新虫 (正式写手)

你这个剂量我估计血药浓度顶多0.03mg/ml,稀释的话不会用血浆去稀释的,直接十倍沉淀,再用进样溶液稀释,满足灵敏度前提下稀释越多越好

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2楼2021-05-03 11:07:02
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panyuanfu

新虫 (正式写手)

拿不准线性范围的话可以先拿第一个时间点样品半定量一下

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3楼2021-05-03 11:08:29
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panyuanfu

新虫 (正式写手)

看不懂为什么样本血样里还要加对照品溶液

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4楼2021-05-03 11:11:13
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药化小菜鸡

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuanfu at 2021-05-03 11:08:29
拿不准线性范围的话可以先拿第一个时间点样品半定量一下

谢谢老师,请问这个半定量什么意思呢?需要加内标吗?还是直接沉淀蛋白,然后取上清液进样,看峰面积
5楼2021-05-03 11:11:27
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药化小菜鸡

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuanfu at 2021-05-03 11:07:02
你这个剂量我估计血药浓度顶多0.03mg/ml,稀释的话不会用血浆去稀释的,直接十倍沉淀,再用进样溶液稀释,满足灵敏度前提下稀释越多越好

谢谢老师,老师您是怎么根据给药方案来判断体内血药浓度的?您的意思是,我取100ul血,用1ml乙腈去沉淀,然后取上清液再去容量瓶定容?
还有,按照老师您说的这个血药浓度最大才0.03mg/ml(30ppm). 那我的标曲点需要重新调整吗?
6楼2021-05-03 11:18:51
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old_yang

铁杆木虫 (著名写手)

理论归理论,实际得先做一下预实验。才知道你的方法行不行。

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7楼2021-05-03 18:46:06
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Adam Cole

新虫 (正式写手)

空白血或者用sd0的空白上清稀释

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8楼2021-06-24 17:33:21
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