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abcjlm

铜虫 (小有名气)

[求助] amp抗性菌发酵

amp抗性菌发酵过程中会产生内酰胺酶,是抗生素降解,会使发酵液中抗生素浓度降低,不含质粒的菌株疯长或拷贝数降低,导致重组蛋白浓度降低,请问有什么好的解决办法吗
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诶_真的嘛

新虫 (小有名气)

由于amp是β内酰胺类抗生素,其作用机理跟kana等抗生素不一样,它的内酰胺环会被质粒amp抗性基因表达的酶切割断裂,从而水解amp,使带抗性基因的细胞得以存活。对于摇瓶低密度表达,amp的量足够,所以还好。但要是上罐发酵,菌体密度大,加入的amp被水解消耗,可能导致质粒丢失、污染等情况,虽然可以通过补加amp的措施补救,但由于不好监控,且对细胞生长状态以及不同批次的重复性等等都会产生影响,所以不推荐这么干。最方便的就是改质粒抗性。另外,如果是制药,中国药典是明确规定发酵不得使用内酰胺类抗生素的。

发自小木虫Android客户端
3楼2021-05-01 13:07:06
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)


可以用卡那抗性的质粒,或者换成羧卞就好了

发自小木虫Android客户端
2楼2021-04-30 11:10:24
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