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小树懒很好

新虫 (小有名气)

[求助] his蛋白挂柱效率低 已有1人参与

C端6xhis蛋白(108kda)纯化时,使用GE的6FF树脂,载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白,确定不过载。
且质粒测序结果正确,ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。

改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢

his蛋白挂柱效率低


his蛋白挂柱效率低-1


@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

你好,你先说下你具体用的是GE哪个产品,用的是GE的金属螯合高流速吗,是IDA,NTA,TED哪个?螯合的是哪种离子?一般来说,钴的结合最弱,铜的最强。NTA分辨率较高,载量较低,IDA相比较于NTA载量高,但杂带也相对会较多一点。还有就是你的样品处理怎么样?一般IDA和NTA是不耐受含DTT还原剂和EDTA的样品的,也就是说样品有这些东西也是不挂或者挂的很少。鉴于你的情况,你可以考虑一下TED的产品。需要可以联系我。
21楼2021-05-06 09:49:39
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Nansenary

新虫 (初入文坛)

2楼2021-04-19 00:43:42
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Nansenary

新虫 (初入文坛)

3楼2021-04-19 00:43:59
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

缓冲液pH多少?缓冲液里咪唑含量有多少?
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-04-19 12:31:53
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