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小树懒很好

新虫 (小有名气)

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[求助] his蛋白挂柱效率低已有1人参与

C端6xhis蛋白（108kda）纯化时，使用GE的6FF树脂，载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白，确定不过载。
且质粒测序结果正确，ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his，或在N端再添加
6xhis后，仍在流出液中有大量目的蛋白存在。

改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端

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1楼2021-04-18 23:45:44

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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

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【答案】应助回帖

你好，你先说下你具体用的是GE哪个产品，用的是GE的金属螯合高流速吗，是IDA，NTA，TED哪个？螯合的是哪种离子?一般来说，钴的结合最弱，铜的最强。NTA分辨率较高，载量较低，IDA相比较于NTA载量高，但杂带也相对会较多一点。还有就是你的样品处理怎么样？一般IDA和NTA是不耐受含DTT还原剂和EDTA的样品的，也就是说样品有这些东西也是不挂或者挂的很少。鉴于你的情况，你可以考虑一下TED的产品。需要可以联系我。