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海韵楠馨

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 26097371
注册: 2021-03-31
性别: GG
专业: 中药药效物质

[求助] DNS试剂测定α-淀粉酶抑制剂活性

大家好，本人想测定某种物质对α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法测定产物糖的方法。
我是自己提取天然产物，然后买淀粉酶，测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。

根据文献的步骤修改：精确吸取 0. 1mL的样品和 0. 1mL 5U/mL的α-淀粉酶溶液（用浓度与样品与对照品区分不开），充分混匀，在 37℃下反应10 min，然后加入0.1mL 1%可溶性淀粉液，在 37 ℃水浴中准确反应 5 min。再加入 0.2mL DNS 显色剂，在沸水浴中反应 3 min，之后立即用流动自来水冷却 (终止反应)，用PBS稀释10倍在 540 nm 波长下测定吸收度，记为 OD。
样品用2%DMSO*PBS配置、1%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液从试剂公司购买。

但是根据这个步骤做出来，样品组（样品+α-淀粉酶溶液），空白对照组（用2%DMSO*PBS代替样品，其他同上），阴性组（用PBS代替酶，其他与样品/空白组一致）煮沸6分钟后，红棕色颜色很深，PBS稀释减去阴性对照OD后，样品浓度梯度小时，样品组OD值与空白组OD值几乎差不多，样品吸光度参差不齐，无趋势，有几次做还会比空白组高。浓度梯度大时，有效果趋势。

求大神帮忙，我是试了好多还不出满意结果，希望各位大神提供帮助，谢谢！@lifeliuyan

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