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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】用ESI做蛋白总堵。
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人！

[交流] 【求助】用ESI做蛋白总堵。

做ESI-MS,我的蛋白样品（6万多的）总堵，刚做完不堵，洗针的时候刚开始也不堵，洗得过程就慢慢堵了，我的样品是标准品，用的是超纯水和甲醇稀释的，没有加盐和缓冲液。就是蛋白先配置成水溶液，然后稀释一下，进质谱的。大家帮我分析一下原因。
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没有比看不到希望更让人失望了，绝望啊！
1楼 2009-08-09 10:05:34
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德
★
dyg123(金币+1,VIP+0):多谢，帮我顶了 8-9 11:24
不是很懂，帮你顶下
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有梦就有力量，有心就会成功！
2楼2009-08-09 10:10:45
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yuzhan

木虫 (正式写手)

Keep moving forward
用什么溶液洗针？
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3楼2009-08-09 17:50:18
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ccixx

银虫 (著名写手)
我用ESI，不过没有做过蛋白！
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4楼2009-08-09 20:01:14
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wenj2377

木虫 (著名写手)
也想知道
帮你顶下
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5楼2009-08-09 20:02:05
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exw

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
dyg123(金币+1,VIP+0):多谢 8-11 08:22
happy169(金币+2,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来分析版 11-16 08:10
引用回帖:
Originally posted by dyg123 at 2009-8-9 10:05:
做ESI-MS,我的蛋白样品（6万多的）总堵，刚做完不堵，洗针的时候刚开始也不堵，洗得过程就慢慢堵了，我的样品是标准品，用的是超纯水和甲醇稀释的，没有加盐和缓冲液。就是蛋白先配置成水溶液，然后稀释一下，进质 ...

基本常识错误，怎么能用甲醇稀释呢？醇类是沉淀蛋白的，应该加甲酸，帮助蛋白离子化。这么大的蛋白，ESI基本上是多电荷的！如果离子化不好，可以用MALDI-TOF做，一般用SPA做基质，这个分子量没有问题的。
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6楼2009-08-09 21:49:00
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人！
引用回帖:
Originally posted by exw at 2009-8-9 21:49:



基本常识错误，怎么能用甲醇稀释呢？醇类是沉淀蛋白的，应该加甲酸，帮助蛋白离子化。这么大的蛋白，ESI基本上是多电荷的！如果离子化不好，可以用MALDI-TOF做，一般用SPA做基质，这个分子量没有问题的。

我每次做的时候不堵，做完了洗针刚开始也不堵，洗针的过程慢慢就堵了。先用水洗，再用甲醇洗。用甲醇溶解蛋白也没有沉淀析出，稀释后也是透明的。用maldi我已经做出来了，我就想试试ESI.多谢你的建议。
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没有比看不到希望更让人失望了，绝望啊！
7楼2009-08-11 08:29:54
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人！
引用回帖:
Originally posted by yuzhan at 2009-8-9 17:50:
用什么溶液洗针？

先用水洗，后用甲醇洗。
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没有比看不到希望更让人失望了，绝望啊！
8楼2009-08-11 08:30:47
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人！
怎么没有人答复呢
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没有比看不到希望更让人失望了，绝望啊！
9楼2009-11-15 15:32:34
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mikeliubao

金虫 (小有名气)
★ ★
dyg123(金币+1,VIP+0):谢谢 11-15 22:30
happy169(金币+1,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来分析版 11-16 08:10
一般做蛋白不用甲醇做溶剂，容易有沉淀。一般用乙腈做溶剂。

你说的不堵，是刚开始压力增大小，慢慢有沉淀沉积，后来就发现堵了。
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10楼2009-11-15 21:35:28
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