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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人!

[交流] 【求助】用ESI做蛋白总堵。

做ESI-MS,我的蛋白样品(6万多的)总堵,刚做完不堵,洗针的时候刚开始也不堵,洗得过程就慢慢堵了,我的样品是标准品,用的是超纯水和甲醇稀释的,没有加盐和缓冲液。就是蛋白先配置成水溶液,然后稀释一下,进质谱的。大家帮我分析一下原因。
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没有比看不到希望更让人失望了,绝望啊!
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德


dyg123(金币+1,VIP+0):多谢,帮我顶了 8-9 11:24
不是很懂,帮你顶下
有梦就有力量,有心就会成功!
2楼2009-08-09 10:10:45
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yuzhan

木虫 (正式写手)

Keep moving forward

用什么溶液洗针?
3楼2009-08-09 17:50:18
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ccixx

银虫 (著名写手)


我用ESI,不过没有做过蛋白!
4楼2009-08-09 20:01:14
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wenj2377

木虫 (著名写手)

也想知道
帮你顶下
5楼2009-08-09 20:02:05
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exw

木虫 (初入文坛)

★ ★ ★
dyg123(金币+1,VIP+0):多谢 8-11 08:22
happy169(金币+2,VIP+0):谢谢参与,欢迎常来分析版 11-16 08:10
引用回帖:
Originally posted by dyg123 at 2009-8-9 10:05:
做ESI-MS,我的蛋白样品(6万多的)总堵,刚做完不堵,洗针的时候刚开始也不堵,洗得过程就慢慢堵了,我的样品是标准品,用的是超纯水和甲醇稀释的,没有加盐和缓冲液。就是蛋白先配置成水溶液,然后稀释一下,进质 ...

基本常识错误,怎么能用甲醇稀释呢?醇类是沉淀蛋白的,应该加甲酸,帮助蛋白离子化。这么大的蛋白,ESI基本上是多电荷的!如果离子化不好,可以用MALDI-TOF做,一般用SPA做基质,这个分子量没有问题的。
6楼2009-08-09 21:49:00
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人!

引用回帖:
Originally posted by exw at 2009-8-9 21:49:



基本常识错误,怎么能用甲醇稀释呢?醇类是沉淀蛋白的,应该加甲酸,帮助蛋白离子化。这么大的蛋白,ESI基本上是多电荷的!如果离子化不好,可以用MALDI-TOF做,一般用SPA做基质,这个分子量没有问题的。

我每次做的时候不堵,做完了洗针刚开始也不堵,洗针的过程慢慢就堵了。先用水洗,再用甲醇洗。用甲醇溶解蛋白也没有沉淀析出,稀释后也是透明的。用maldi我已经做出来了,我就想试试ESI.多谢你的建议。
没有比看不到希望更让人失望了,绝望啊!
7楼2009-08-11 08:29:54
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人!

引用回帖:
Originally posted by yuzhan at 2009-8-9 17:50:
用什么溶液洗针?

先用水洗,后用甲醇洗。
没有比看不到希望更让人失望了,绝望啊!
8楼2009-08-11 08:30:47
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dyg123

木虫 (著名写手)

拥有中国绿卡的男人!

怎么没有人答复呢
没有比看不到希望更让人失望了,绝望啊!
9楼2009-11-15 15:32:34
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mikeliubao

金虫 (小有名气)

★ ★
dyg123(金币+1,VIP+0):谢谢 11-15 22:30
happy169(金币+1,VIP+0):谢谢参与,欢迎常来分析版 11-16 08:10
一般做蛋白不用甲醇做溶剂,容易有沉淀。一般用乙腈做溶剂。

你说的不堵,是刚开始压力增大小,慢慢有沉淀沉积,后来就发现堵了。
10楼2009-11-15 21:35:28
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